Produkterne opnået ved in vitro cyklisering og RNase R berigelse kræver yderligere fjernelse fra in vitro transkription (IVT), herunder uforbrugte substrater i cykliseringsreaktion, reaktionsbiprodukter og nicked RNA.
Yaohai Bio-Pharma har moden LiCl-udfældning, magnetisk perlerensning, selvudviklet oprensning og andre diversificerede oprensningsløsninger til effektivt at fjerne forskellige urenheder og forberede meget rent circRNA.
Oprensningsopløsning til små mængder circRNA til celletransfektion og som en del af dyreforsøg.
Oprensningsopløsning til små mængder circRNA til celletransfektion og som en del af dyreforsøg.
Anvendelsesscenarier med højere kvalitet;
Stabil og skalerbar oprensningsproces for at opfylde GMP-produktionskravene.
Proces | Valgfri service | Service detaljer | Leveringsperiode (dag) | Leverancer |
circRNA-oprensning | Konventionel renseopløsning | Lithiumchloridudfældning | 1 | circRNA lægemiddelstof |
Magnetisk perlerensning | ||||
Meget ren circRNA-oprensning | Præparativ højtydende væskekromatografi (HPLC) | 1-2 | ||
Bufferudveksling | Ultrafiltrering | 1 | ||
circRNA kvalitetskontrol | Koncentration/rens | Ultraviolet (UV) spektrofotometri | 0.5 | Test rapport |
Renhed | Agarosegelelektroforese (AGE)/E-gel | |||
HPLC-valgfri | 1 |
Anvendelsesscenarier kan opnås.
circRNA med en renhed på mere end 90%;
Gennem stringent kontrol af RNaser i det eksperimentelle miljø og forbrugsvarer forhindres RNA-nedbrydning effektivt.
Yaohai Bio-Pharma har etableret en moden circRNA-oprensningsopløsning, der effektivt kan fjerne forskellige procesrelaterede urenheder.
De cirkulære RNA-produkter, der er oprenset med den konventionelle opløsning, er stadig åbenlyst blandet med hakket RNA og introner.
Efter rensningsopløsningen udviklet af Yaohai Bio-Pharma, kan forskellige lineære RNA-urenheder, såsom nicked RNA og introns, med succes fjernes.
circRNA-ekspressionsvalidering
Ved hjælp af et konventionelt liposom transficeres oprenset eGFP circRNA ind i 293T-celler, og et fluorescenssignal observeres efter 24 timer og fortsætter med at blive forstærket efter 48 timer. Fluorescenssignalet kan stadig detekteres på den 7. dag og den 14. dag efter transfektion.