Ifølge den centrale dogme er messenger RNA (mRNA) broen for overførslen af genetisk materiale fra DNA til protein.
mRNA udfører en biologisk funktion ved at kodere protein in vivo, og moden mRNA i eukaryotiske organismer består af fem komponenter: 5' Cap (cap-struktur), 5' UTR (ikke-kodende region), ORF (åbent læseframe), 3' UTR, og 3' polyA hale (polyadenylathale).
Tjenesteoplysninger
| Proces |
Valgfrit Tjenesteudbud |
Servicedetaljer |
Leveringsperiode (Dag) |
| design og optimering af mRNA-sekvenser |
Design og optimering af kodende sekvenser |
Justering af CDS-sekvenser
Codonoptimering af CDS
|
1 |
| Design og optimering af ikke-kodende sekvenser |
design og optimering af 5' UTR-sekvens
design og optimering af 3' UTR-sekvens
design og optimering af polyA-sekvens
|
1-2 |
Tilpasningsmuligheder
| 5’ UTR\/3’ UTR |
- Naturlig UTR-sekvens
- Mutant/Designet UTR-sekvens
|
| 3' PolyA hale |
- 100A ~120A hale (anbefalet)
- Segmenteret polyA hale
- Anden tilpasset hale
|
Almindelige Strategier for mRNA Sekvensdesign
| mRNA Komponenter |
Biologiske Funktioner |
Optimeringsstrategier |
| 5’ Cap |
Beskyt mRNA mod nedbrydning af exonukleaser og virker sammen med polyA hale på 3' enden, polyA bindingsprotein og translationsinitiationsfaktorprotein for at initiere proteintranslation. |
Den naturlige Cap1 struktur undgår mønstererkendelsesreceptorer og reducerer derfor den naturlige immunrespons, hvilket kan opnås ved en-trins co-transkriptionel capping eller to-trins enzymatisk capping [se mRNA enzymatisk capping og co-transkriptionel capping for flere detaljer]. |
| 5’ UTR |
5' UTR kan genkendes af ribosomer, regulere translationen af mRNA og påvirke stabilningen af mRNA. |
Indeholder Kozak sekvenser uden en meget stabil sekundærstruktur. Naturlige UTR'er fra højtydende gener er foretrukne til in vitro transkription (IVT) mRNA, såsom α-globin og β-globin. |
| CDS |
Proteinkodende regioner og kodesekvenser for antigen, antistoffer eller andre funktionelle proteiner. |
Codonoptimering øger oversættelsesniveauet, med bemærkning af at visse ikke-optimale codoner muligvis spiller en rolle i proteinfoldingen. |
| 3’ UTR |
Regulerer mRNA-oversættelse og -stabilitet. |
Naturlige UTR'er fra højtydende gene foretrækkes til IVT-mRNA'er såsom α-globin og β-globin. |
| 3’ polyA hale |
Regulerer proteinekspression og beskytter cap-strukturen mod nedbrydning. |
En tilstrækkelig længde (100-150 bp) er nødvendig; kodning af polyA hale på transskriptionsskabelonplasmidet sikrer en mere defineret polyA halelængde. |
Vores træk
- Diversificeret UTR kildevælgelse
Flere kilder af højgradigt udtrykte naturlige & modifikerede UTR-biblioteker; moden UTR-modifikationsstrategi;
- Forskningsgruppe inden for CDS-optimering
Samarbejder med et professionelt AI-algoritmer team for at gennemføre optimeringen af codoner.
- Jævn polyA-slutningfordeling
Tilføjer polyA-sekvenser i overensstemmelse med DNA-skabeloner for at kontrollere længden af mRNA mere nøjagtigt.
- Diversificerede optimeringskombinationer
Opnår effektivt udtryk af mRNA med lav immunogenitet.
Case studie
Sekvensdesign af en dobbelt-reportermRNA: mCherry-eGFP mRNA
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-service fortsætter med at blive opgraderet med design og optimering af en dobbelt reporter gen sekvens, hvilket opnår ko-udtryk af to gener.
Ved hjælp af et konventionelt transfektionsmiddel transfecteres den dobbelt gen tandemsekvens mCherry-eGFP mRNA i 293T-celler, og der registreres to fluorescerende signaler fra mCherry (rød) og forstærket grøn fluorescerende protein (eGFP) med samtidigt udtryk efter 48 timer, og det overlappende diagram fremhæves i gul.
Ekspression af mCherry-eGFP mRNA i 293T-celle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
