Plasmid DNA, som in vitro transkriptions (IVT) skabelon, er en vigtig råvare for mRNA-produktion. Høj udbytte, høj renhed og høj genforening af plasmid DNA er den største mål under udviklingen af plasmidprocessen.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder en omfattende løsning for plasmidudvikling, herunder opstrøms (fermentering), nedstrøms (rensnings) procesudvikling, proceskarakterisering og procesvalidering. Vi har omfattende erfaring med at forbedre plasmidudbyttet og isolere det fra komplekse matricer ved at udvikle og optimere fermenterings-, rensnings- og fjerningsprocesser for snavs.
Den grundlæggende bioprocess for plasmidproduktion omfatter: Escherichia coli (E. coli) fermentering, cellehavst og alkalisk lysning, klarificering, koncentration, tre-trins chromatografi proces (fangst, mellemrensning og polering), og koncentration.
Servicedetaljer | Enhedsoperationer | Parametre |
E. coli fermentering |
Rysteflask | Mediekompositioner, antibiotika, inokulumvolumen, væksttemperatur og andre. |
Fermenter (7 L) |
Antibiotika, inokulumvolumen, væksttemperatur, pH, oppløst syre (DO), fødemåde (f.eks. fed-batch), fode medier, fermeneringstid og andre. |
|
Cellehavest | Microfiltration | Standard E. coli havesteringsproces |
Cellelyse | Cellegensuspension, alkalisk lyse, neutralisering | Alkali forhold, lysistid |
Klarhed | Filtrering | Råfiltrering, 20 µm og en 5 µm filtreringskedel (foretrukket) |
Koncentration | Ultrafiltrering, tangential flow filtrering | Porestørrelse (eller NMWC), Transmembrantryk (TMP), Flux, filtratvolumen til membranarealforhold |
Tre-trins chromatografi | Størrelseseksklusionschromatografi (SEC) eller gelfiltrationschromatografi (GFC) | Søjlelængde og -diameter, tampekomposition, indsprøjtningsvolumen, mobile fasekomposition (adsorption og desorption), pH, strømningshastighed, afbalancerings-, binding-, vask- og elutionsbetingelser. |
Affinitetschromatografi (AF) | ||
Anionvekslingschromatografi (AEX) | ||
Koncentration | Ultrafiltrering, tangential flow filtrering | Porestørrelse (eller NMWC), Transmembrantryk (TMP), Flux, filtratvolumen til membranarealforhold |
Flere løsninger til reningsprocesser for biologiske stoffer |