5'-end capping er en afgørende ændring af mRNA. mRNAs med cap-strukturer, især Cap1-strukturer, gør det lettere for mRNAs at undgå innate immunrespons i vivo, hvilket resulterer i effektiv proteinoversættelse.
Enzygotisk capping (to-trins-metoden) er den konventionelle metode til mRNA-capping, lignende capping-processen i eukaryotiske organismer. Under virkningen af en række enzym binder 7-methylguanin (m7G) til 5'-enden af mRNA via en 5'-5' triphosphatbinding og udfører methylationsændringen for at danne cap-strukturen Cap 1 (m7GpppN).
Diagram over naturlig cap-strukturformation
Den enzygotiske capping-reaktion følger denne strømning:
Lineariseret plasmid-DNA bruges som skabelon til in vitro-transkription (IVT) i tilstedeværelsen af T7-polymerase, og mRNA med en 5'-end-cap-struktur dannes efter en enkelttrinsrensningsproces ved hjælp af vaccinia-capping-enzymet og 2'-O-methyltransferase.
Tjenesteoplysninger
Valgfrit Tjenesteudbud |
Servicedetaljer |
Leveringsperiode (Dag) |
mRNA Enzymatisk Capping |
Enzymatisk capping-reaktion |
1 |
Optimering af capping-reaktion - valgfri |
Design og optimering af reaktionskomponenter |
3~7 |
Vores træk
- Design og optimering af capping-reaktionens komponent
Capping-reaktionens komponent er blevet optimeret, og produktionen af mRNA-transkriptet er blevet meget forøget.
- Verifikation af in vitro-udtryk
Det capped mRNA transfekteres i 293T-celler, og udtrykket af det målprotein kan registreres.
Gennem strikt kontrol med RNase i eksperimentel miljø og forbrugsmaterialer forhindres degradationsprocessen af mRNA effektivt.
Case studie
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-platform har etableret en perfekt capping-reactionsproces.
For eGFP mRNA, et mRNA-præprodukt forberedt ved enzymatisk capping, kan der observeres et eGFP fluorescenssignal (grøn fluorescens) på høj niveau 24 timer efter transfektion af 293T-celler, hvilket detekteres ved Western Blot (WB), hvilket viser, at målproteinet enhanced green fluorescent protein (eGFP) kan udtrykkes effektivt in vitro.
Udtrykning af Enzymatisk Capped eGFP mRNA i 293T-Celle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
