Alle kategorier
mRNA Ko-transkriptionscapping

mRNA Ko-transkriptionscapping

Forside >  IVT RNA  >  Tilpasset RNA Syntese  >  Tilpasset mRNA Syntese  >  mRNA Ko-transkriptionscapping

mRNA Co-transkriptional Capping

I forhold til den to-trins enzymatiske capping kan den en-trins co-transkriptionelle capping-metode betydeligt reducere procesflowet. Metoden er resultatorienteret og involverer tilføjelse af cap-analoger til den in vitro transkription (IVT)-reaktion. Cap-analoger kan introduceres ved begyndelsen af transkriptionen, og mRNA med cap-struktur kan opnås ved afslutningen af transkriptionen. De nuværende tredjegenerations cap-analoger kan undgå omvendt capping og direkte tilføje Cap 1-struktur til transkriptionsproduktet.

Af hensyn til mRNA's immunogenitet in vivo og oversættelseseffektivitet anvender IVT-processen ofte visse typer af modificerede NTP'er, og de almindelige modificerede nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-methyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-methylcytosin (5mC).

undefined

undefined

Figur: Skitse af mRNA Co-transkription og Capping-Reaktion

Servicedetaljer

Service

Servicedetaljer

Leveringsperiode (arbejdsdag)

Co-transkriptionel capping

In vitro transskriptionsrespons (Clean Cap analog) 1-2
Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC)
Fjernelse af DNA-skabelon (DNase I)

Optimering af IVT-betingelser - valgfrit

Design og optimering af reaktionskomponenter 3-7
Vores træk
  • Diversificerede Nukleotidmodifikationsstrategier

Flere valgfrie nukleotidmodifikationsstrategier kan forbedre proteinekspressionen.

  • Optimeret Reaktionssystem

Opnå et højt transkriptionsforhold og en høj capping-effektivitet.

  • Stabil Capping-proces

Opnå en capping rate på mere end 95%.

  • Strikte kontrol af RNase

Forhindre mRNA nedbrydning effektivt ved strikt kontrol af RNase i det eksperimentelle miljø og forbrugsmaterialer.

Case studie

Yaohai Bio-Pharma har oprettet et moden co-transcriptional capping procesplatform, hvor der bruges rene cap analoger til at tilføje Cap1-struktur direkte, samtidig med at man undgår omvendt capping. Efter standardiseret prøveforbehandling og kapillær-elektroforese (CE) detektering, kan capping raten for den forstærkede grøn fluorescerende protein (eGFP) mRNA nå mere end 95%.

图片图片

capping effektivitet for eGFP mRNA på mere end 95%

Den co-transcriptionalt cappede eGFP mRNA og mCherry mRNA transfectes i 293T celler henholdsvis, og der observeres en stærk fluorescerende signal efter 48 timer, hvilket indikerer, at mRNA'et effektivt udtrykkes i 293T cellerne.

图片

Udtryk for eGFP mRNA og mCherry mRNA i 293T celle

Få et gratis tilbud

Get in touch