Angående massaproduktion af mRNA er in vitro transkription (IVT) en mere effektiv og moden metode. IVT-reaktionen anvender lineariseret plasmid-DNA, der indeholder T7-promotor som skabelon, og mRNA syntetiseres med nukleosidtrifosfat (NTP'er) som substrat i tilstedeværelse af T7 RNA-polymerase.
Nukleotidmodifikation er en gennembrud i udforskningen af mRNA, hvor ikke-modificerede mRNA-molekyler genkendes af intracellulære RNA-sensorer for at aktiverer fødselshjemlige immunforsvar. Af hensyn til mRNA's in vivo immunogenitet og translateringseffektivitet anvender IVT-processen normalt visse typer modificerede NTP'er, og almindelige modificerede nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-methyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-methylcytosin (5mC).
In vitro Transkriptionsprocessen af mRNA
Skitse af in vitro transkriptions (IVT)-reaktion
Tjenesteoplysninger
Valgfrit Tjenesteudbud |
Servicedetaljer |
Leveringsperiode (arbejdsdag) |
In vitro transkription (IVT) |
IVT, In vitro transkription |
1 |
| Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Fjernelse af DNA-skabelon (DNase I) |
Optimering af IVT-betingelser - valgfrit |
Design og optimering af IVT-reaktionskomponenter |
2-5 |
Vores træk
- Diversificerede Nukleotidmodifikationsstrategier
Forbedr stabilitet af mRNA og proteinet udtryk in vivo.
- Strikt Testdesign og Optimering
forberedelse af mRNA-fragmenter op til 10kb kan opnås.
Ved at optimere IVT-reaktionens betingelser, er transskriptionshastigheden op til 1:200.
Strikte kontrol af RNase gennem et eksperimentelt miljø og forbrugsmaterialer kan effektivt forhindre mRNA-degradation.
Case studie
Den nuværende IVT-reaktionsystem er i høj grad optimeret til syntetiske systemer med en længde på omkring 100 nt, ikke til mRNAs af vilkårlig længde. Jo længere mRNA-sekvensen er, des mere svært er det at transkribere, og des mere følsom er den overfor degradation.
For at forberede tilpassede mRNA-sekvenser med en længde på omkring 10 kb, har Yaohai Bio-Pharma succesfuldt forberedt højkvalitetsprøver med en høj transkriptionsforhold på 1:135 og erhvervet 135 μg af initielt rensete mRNA-produkter efter at 1 μg af lineariseret plasmid blev transkribert in vitro gennem streng eksperimentelt design, kontinuerlig optimering af reaktionsbetingelserne og strikt kontrol af RNase.
mRNA-identifikation (Agarosegelelektroforese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
