Angående batchforberedelse af RNA-prækurser, er en almindelig brugt metode in vitro transkription (IVT). IVT-reaktionen bruger lineariseret plasmid-DNA, der indeholder T7-promotor som skabelon, og syntetiserer en RNA-prækursor med nukleosidtrifosfat (NTP'er) som substrat i tilstedeværelse af T7 RNA-polymerase.
In vitro cirkuleringmetoder inkluderer kemisk ligering, enzymatisk ligering og permuted intron-exon (PIE)-metode. Kemisk ligering og enzymatisk ligering er egnet til cirkulering af korte RNAs. Når fragmentet er større end 100 nt, vil cirkuleringshastigheden falde markant. I modsætning her til kan den på nucléase baserede PIE-metode opnå cirkulering af sekvenser på op til 8 kb.
Under katalyse af guanosintrifosfat (GTP) gennemgår PIE-strukturen cyclisering af ekstra-intron sekvenser. Kombineret med en rimelig strategi for at øge cycliseringshastigheden kan Yaohai Bio-Pharma opnå cyclisering af sekvenser på op til 4 kb, med en cycliseringseffektivitet på mere end 80%.
Cycliseringsreaktionen af RNA foregår som følger:
RNA-præcursoren syntetiseres ved in vitro transkription, og PIE-komponenten fuldfører selv-splicing under katalyse af GTP for at danne circRNA.
Tjenesteoplysninger
| Proces |
Servicedetaljer |
Leveringsperiode (arbejdsdag) |
| In vitro Transkription og Circulation |
Bekræftelse af reaktionsystem |
1-2 |
| In Vitro Transkription og Cyclisationsreaktioner |
| RNase R-digestion |
| Reaktionsoptimering |
Reaktionssammensætning, Tidsoptimering |
2-5 |
Vores træk
- Strikt Testdesign og Optimering
Op cyclisering af op til 4 kb RNA kan opnås.
- Høj effektivitet ved cyclisering
En cycliseringsrate på mere end 80% kan opnås gennem en rationel sekvensoptimeringsstrategi.
Gennem stram kontrol af RNases i det eksperimentelle miljø og forbrugsmateriale, forhindres RNA-degradation effektivt.
Case studie
In vitro cyclisering og berigelse af circRNA
Basert på PIE-systemet har Yaohai Bio-Pharma optimeret sekvensen af circRNA, med en cycliseringsrate på mere end 80% efter agarose gelelektroforese (AGE). Ved hjælp af RNase R til at berige circRNA viser E-gel elektroforese-resultaterne, at den lineære RNA-præcursor er fordøjed, og efter yderligere renning kan de fleste af de nippede circRNA fjernes. Renningsløsningen er selvudviklet af Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulation og berigelse af circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
