Yaohai Bio-Pharma forbereder circRNA baseret på PIE-systemet (justering af eksoner og introner), hvilket afhænger af den selv-splicing funktion af type I introner for at opnå RNA-cyklisering. PIE-strukturen designes ved hjælp af T4 td gen eller fiskets tRNA-prægen, og ordningen er som følger:
RNA-intronen og støtteseksongenfordelen opdeles i to dele (5' terminus og 3' terminus), hvor 5' terminussekvensen overføres til haleenden af målsekvensen, 3' terminussekvensen indsættes foran målsekvensen, og målgensekvensen indsættes midtiblandt.
Under katalysen af GTP fører PIE-strukturen til cyklisering af sekvenser udenom introner. Kombineret med en rimelig forstærkningsstrategi for cykliseringsrate kan Yaohai Bio-Pharma opnå cyklisering af sekvenser op til 4 kb med en cykliseringsrate på mere end 80%.
Figur 1. In vitro-cirkulation af circRNA baseret på PIE-systemet
Tjenesteoplysninger
| Proces |
Valgfrit Tjenesteudbud |
Servicedetaljer |
Leveringsperiode (arbejdsdag) |
| circRNA sekvensdesign og optimering |
Design og optimering af kodende sekvenser |
Justering af CDS-sekvenser
Codonoptimering af CDS
|
1 |
| Design og optimering af ikke-kodende sekvenser |
Intron og eksonsekvensdesign og optimering
Homolog armsekvensdesign og optimering
Design og optimering af spacer-sekvens
|
1-2 |
Almindelige Strategier for mRNA Sekvensdesign
| CircRNA-komponenter |
Biologiske Funktioner |
Optimeringsstrategier |
| To-terminal intron- og exon-sekvenser |
GTP-katalyseret intron selv-splicing til cyclisering af sekvenser udenfor intronet. |
Designet efter T4 td-genet eller fiskolie tRNA-præcursorgen. |
| Kodning |
IRES |
Intern ribosomgenkendelsessite, der regulerer oversættelsen af circRNA. |
Skærmning af intern ribosom indgangssted (IRES) sekvenser fra forskellige virale kilder, f.eks. EMCV, CVB3 kilder. |
| CDS |
Protein-kodende regioner, sekvenser der koder for antigener, antistoffer eller andre funktionelle proteiner. |
Codonoptimering øger oversættelsesniveauet; visse ikke-optimale codoner kan spille en rolle i proteinfolderingen. |
| Ikke-kodende |
Ikke-kodende sekvenser |
Målrettede miRNAs eller proteiner til at udføre gen- eller proteinkontrol. |
Måling af specifikke bindingssteder for miRNAs eller proteiner kan gentage sekvenserne af bindingsstedet. |
Vores træk
- Optimeret PIE Cyclizationsystem Kombination med rimelige optimeringsstrategier for at opnå en cycliseringsrate på mere end 80%;
- Forskningsgruppe for CDS-optimering Samarbejde med en professionel AI-algoritmer-gruppe for at gennemføre optimering af codoner i CDS-regionen;
- Modnet og perfekt proces circRNA kan opnås med høj cyklus-effektivitet, høj stabilitet og høj oversættelseseffektivitet.
Case studie
Yaohai Bio-Pharma har lanceret kontrolproduktet forøget grøn fluorescent protein (eGFP) circRNA, som er baseret på PIE-systemet for at opnå cyklus af RNA.
Ved hjælp af et konventionelt transfektionsmiddel transfecteres eGFP circRNA i 293T-celler, og efter 24 timer kan der opspores en eGFP (grøn) fluorescerende signal, som vil blive forstærket efter 48 timer. Fluorescerende signalet kan stadig opspores den 7. dag og den 14. dag efter transfektionen.
In vitro udtryksvalidering af eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
