Cellebaserede Effektivitetstests
Betydningen af mRNA-effektivitetstest
Med den hurtige udvikling af mRNA-vacciner og -behandlinger er der behov for en specifik række analysemetoder til at teste effektiviteten (definere deres biologiske aktivitet), hvilket involverer oversættelseseffektiviteten af mRNA. Disse metoder er typisk baseret på celletransfektion og funktionelle tests af målproteinet.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder cellebaserede effektivitetstests for mRNA-drikkevæsener eller LNP-produkter, herunder celletransfektion (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 celler osv.) og ELISA eller Western Blotting (WB) tests.
Reguleringskrav for effektivitetstests
Ifølge WHO's regulære overvejelser, "Bør styrken af hver part af den endelige vaccine afgøres ved hjælp af en tilstrækkelig kvantitativ og valideret funktionel metode(r). Mulige in vitro styrkeassayer kan omfatte cellebaserede transfektionssystemer eller cellfrie assayer." Og USP anbefalede en "cellebaseret assay" til at teste styrken af mRNA, dvs. udtrykket af det målprotein.
Analytisk metode
|
Analyse
|
Metoder
|
|
Styrkeassayer
|
Cellebaseret transfektion og identifikation af målprotein:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 celler, mv.
|
Procedure
Trin 1. Cellebaseret Transfektion med mRNA eller mRNA-LNP
Cellerne kultiveres og transfekteres med mRNA eller mRNA-LNP. I detaljer bliver mRNA transfekteret efter at være blevet blandet med et transfektionsreagens, mens mRNA-LNP direkte transfekteres i cellerne. Efter 24-48 timer klargøres supernatanten, der indeholder det udtrykte protein, ved centrifugering.
Trin 2. Funktionelle Assayer af Målprotein
Udfør ELISA- eller WB-analyser for at vurdere den funktionelle binding af målproteiner.
Case studie
Cellebaserede Virkningsanalyser af mRNA-prøver
Yaohai-BioPharma har udviklet en cellebaseret virkningsanalysemetode for mRNA, som omfatter cellekultur, celletransfektion og proteinfunktionelle analyser. Vi transfekterede eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA og spike-protein mRNA i 293T-celler og registrerede målproteinet via fluorescens, lysende eller farvet signal, WB, ELISA.
Cellebaserede Virkningsanalyser af mRNA-produkter af Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
