Uz šķidruma hromatogrāfijas masas spektrometrijas (LC-MS) balstīti peptīdu kartēšanas dati sniegs lielu daudzumu informācijas par primāro un augstākas kārtas native un rekombinanto proteīnu struktūru, tostarp aminoskābju secību pārklājumu, pēctranslācijas modifikācijām (PTM, piemēram, glikozilāciju). , oksidēšana, deamidēšana), disulfīda saites utt.
Yaohai Bio-Pharma piedāvā peptīdu kartēšanas analīzes pakalpojumus jūsu mērķa proteīnam, izmantojot LC-MS, lai paātrinātu olbaltumvielu struktūras izpēti.
Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu, tostarp rekombinanto apakšvienību vakcīnu, nanoķermeņu/VHH/ viena domēna antivielu (sdAb), antivielu fragmentu, hormonu/peptīdu, citokīnu, augšanas faktoru (GF), enzīmu, strukturālajā raksturojumā. utt.
Normatīvās prasības peptīdu kartēšanai
ICHQ6B vadlīnijas iesaka: “Produkta selektīvu fragmentāciju atsevišķos peptīdos veic, izmantojot piemērotus fermentus vai ķīmiskas vielas, un iegūtos peptīdu fragmentus analizē ar HPLC vai citu piemērotu analītisko procedūru. Peptīdu fragmenti pēc iespējas jāidentificē, izmantojot tādas metodes kā aminoskābju sastāva analīze, N-termināla sekvencēšana vai masas spektrometrija (MS). Aktīvās vielas vai zāļu (DP) peptīdu kartēšana, izmantojot atbilstoši apstiprinātu metodi, ir metode, ko bieži izmanto, lai apstiprinātu vēlamo produkta struktūru sērijas izlaišanai.
Analītiskās metodes
| Analīze |
Metodes |
| Peptīdu kartēšana |
Proteāzes gremošana un šķidruma hromatogrāfijas masas spektrometrija (LC-MS) |
Analītiskā procedūra
1. Reducēšana un alkilēšana
Mērķis ir samazināt disulfīda tiltus un bloķēt radīto brīvo tiolu. Disulfīdu tiltu samazināšana palīdz atvērt proteīna struktūru, kas padara proteolītisko gremošanu efektīvāku. Šis solis arī pārtrauks tiltus starp ķēdēm vairāku ķēžu proteīnu gadījumā, kuriem ir disulfīda tilti, kas savieno ķēdes (piemēram, monoklonālās antivielas, mAb).
2. Olbaltumvielu sagremošana, izmantojot enzīmus
Mērķis ir sadalīt proteīnu peptīdos. Mēs izvēlējāmies fermentus, pamatojoties uz proteīna teorētisko secību un zināšanām par proteīna teorētisko sagremošanu ar fermentiem. Izvēloties fermentus šādā veidā, vajadzētu iegūt vislabāko peptīdu kartēšanas analīzi.
3. Sagremoto peptīdu analīze Tiešsaistes reversās fāzes augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfijas izmantošana ar ultravioleto (UV) un elektrosmidzināšanas masas spektrometrisko noteikšanu (LC/ES-MS).
Peptīdu atdalīšana, pamatojoties uz polaritāti, izmantojot LC (reverse phase-LC)
Peptīdam eluējoties no LC kolonnas, masas spektrometrs ģenerēs masu informāciju kopā ar informāciju par jonu fragmentiem, kas ļauj mums noteikt secības informāciju. Mēs izmantojam secības informāciju, lai apstiprinātu peptīda identitāti un sniegtu primāro informāciju.
Mēs varam arī ģenerēt fragmentācijas informāciju no peptīdiem, kad tie nonāk masas spektrometra avotā no LC kolonnas. Atkarībā no pētījuma prasībām tas ir vai nu selektīvs LC-MS/MS, vai neselektīvs, ko var uzskatīt par tandēma MS formu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
