N-glikozilācijas vietas aizņemšana ir glikoproteīnu fizioloģiska iezīme un galvenokārt ražo N-glikānu. Yaohai Bio-Pharma N-glikozilācijas vietas noslogojuma analīzes pakalpojums tiek veikts, izmantojot gremošanu, atbrīvošanu, bagātināšanu un analīzi, izmantojot šķidruma hromatogrāfiju-elektrosmidzināšanas jonizācijas masas spektrometriju-masas spektrometriju (LC-ESI-MS/MS).
Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu, tostarp rekombinanto apakšvienību vakcīnu, nanoķermeņu/VHH/ viena domēna antivielu (sdAb), antivielu fragmentu, hormonu/peptīdu, citokīnu, augšanas faktoru (GF), enzīmu, strukturālajā raksturojumā. utt.
Normatīvās prasības N-glikozilācijas vietas aizņemtībai
Saskaņā ar ICH Q6B vadlīnijām “glikoproteīniem tiek noteikts ogļhidrātu saturs (neitrālie cukuri, aminocukuri un sialskābes). Turklāt, cik vien iespējams, tiek analizēta ogļhidrātu ķēžu struktūra, oligosaharīdu modelis (antenārais profils) un polipeptīdu ķēdes glikozilācijas vieta(-as).
Analītiskā metode
| Analīze |
Metodes |
| N-glikozilācijas vietas noslogojums |
LC-MS pēc degglikozilāzes un proteāzes gremošanas |
Procedūras
1. Olbaltumvielu šķelšana ar olbaltumvielām, lai radītu mazus peptīdu fragmentus.
2. N-glikāna atbrīvošana, izmantojot endoglikozidāzi H vai PNGāzi F. Endoglikozidāze H sašķeļ saiti starp diviem GlcNAc atlikumiem N-saistīto glikānu kodolā, savukārt PNGāze F ir glikoamidāze, kas sarauj saiti starp GlcNAc un Asn, atbrīvojot visu. cukura ķēdi un pārvēršot Asn par Asp, masai palielinoties par 1-Da.
3. N-glikopeptīda bagātināšana, izmantojot HILIC (hidrofilās mijiedarbības šķidruma hromatogrāfiju)
4. N-saistītās glikozilācijas vietas aizņemtības analīze, izmantojot LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
