N-glikānu profilēšana ir būtiska biofarmaceitisko līdzekļu ražošanā. Yaohai Bio-Pharma nodrošina N-glikānu profilēšanas pakalpojumu, izmantojot atbrīvoto un iezīmēto glikānu šķidruma hromatogrāfijas masas spektrometriju (LC-MS). N-glikānu parauga sagatavošanas vispārīgie soļi ietver glikoproteīna (GP) sagremošanu, deglikozilāciju, attīrīšanu, marķēšanu/atvasināšanu un cietās fāzes ekstrakciju (SPE).
Mēs esam bijuši iesaistīti dažādu lielu molekulu, tostarp rekombinanto apakšvienību vakcīnu, nanoķermeņu/VHH/ viena domēna antivielu (sdAb), antivielu fragmentu, hormonu/peptīdu, citokīnu, augšanas faktoru (GF), enzīmu, strukturālajā raksturojumā. utt.
Normatīvās prasības N-glikāna profilēšanai
Saskaņā ar ICH Q6B vadlīnijām “glikoproteīniem tiek noteikts ogļhidrātu saturs (neitrālie cukuri, aminocukuri un sialskābes). Turklāt, cik vien iespējams, tiek analizēta ogļhidrātu ķēžu struktūra, oligosaharīdu modelis (antenārais profils) un polipeptīdu ķēdes glikozilācijas vieta(-as).
Analītiskā metode
| Analīze |
Metodes |
| N-glikāna profilēšana |
Izdalīto un iezīmēto glikānu šķidruma hromatogrāfijas masas spektrometrijas (LC-MS) analīze |
Procedūras
1. Enzīmu glikāna atbrīvošana ar peptīdu N-glikozidāzi F (PNGāze F)
2. Atbrīvoto glikānu atvasināšana ar 2-aminobenzamīdu (2-AB)
3. Savākto N-glikānu attīrīšana uz TSK Amide - 80 kolonnas, ja ir liels daudzums mazgāšanas līdzekļu, negaistošu sāļu vai materiālu ar brīvām aminogrupām.
4. Marķēšana ar fluorescējošu 2-aminobenzamīdu (2-AB)
5. Iezīmēto N-glikānu LC-MS analīze
6. Datu analīze
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
