Līdzekļu procesa (DSP) izstrādes nozīme
Visa fermentācijas dzeltene satur mērķa oliecību vai plazmidu, kā arī produktam un procesam saistītus piesārņojumus, piemēram, agregātus, mikroorganismu šūnu substrātus, Mazgājošās Šūnas Oliecības (HCP), Mazgājošās Šūnas DNS (HCD), endotoksīnus un antibiotikus.
Tāpēc ir būtiski izveidot efektīvu DSP, tīrīšanas procesu, lai noņemtu noteiktus piesārņojumus un ražotu augsti tīru un augstas kvalitātes medicīnas vielu. Turklāt tīrīšanas procesa optimizācija var palīdzēt palielināt produkta atgriezienu, samazināt izmaksas un uzlabot procesa masveida un atkārtotības iespējas.
Atslēgvārdi: procesa attīstība, optimizācija un validācija, tīrīšanas process, hromatogrāfija, nevienmērību noņemšana, HCP noņemšana, HCD noņemšana, endotoksiņu noņemšana, proteīna denatūrēšana un refoldēšana, VLP sastādīšana, konjugācija
Pielietojums: bioparmaceitiķu nozare, cilvēku medicīna, dzīvnieku medicīna, vakcīnas, rekombinanti lieli molekulas bioloģiskie preparāti, rekombinanti bioloģiskie preparāti, bioloģiskie reagenti
Yaohai Bio-Pharma DSP risinājumi
Mums ir plaša pieredze mērķa proteīnu vai plazmaidžļu izolēšanā no sarežģītiem matriciem, izstrādājot un optimizējot pēcproduktu tīrīšanas procesu. Dažādiem bioloģisko vielu tīrīšanai piemērotiem vienības operācijām var būt centrifugēšana, filtrēšana, homogenizācija, alkaliska liza, ultrafiltrēšana, izkristalizēšana, proteīna denatūrēšana un refoldēšana, hromatogrāfija utt.
Mūsu piedāvātie tīrīšanas izstrādes pakalpojumi ietver:
- Visas tīrīšanas procesa izstrāde no šūnu vai uzkrājuma savācēšanas līdz galamērķa aktīvajam sastāvdaļas gatavošanai.
- Optimizācija tīrīšanas procesam, pamatojoties uz produktu un procesu saistītām nevajadzībām, lai paaugstinātu produkta kvalitāti un drošību, piemēram, HCP, HCD, endotoxīnu.
- Atzīmju un galveno parametru definēšana un optimizācija vienā vai vairākos apmēru darbību posmos, ieskaitot šūnu līzēšanu, tangentālās plūsmas filtrāciju, ķieģeļa pārbaudi, hromatogrāfiju, proteīna denatūrāciju un refoldingu utt.
- Procesa optimizācija, ņemot vērā kvalitāti, ražojuma apjomu, atgūšanu, izmaksas un masveida pielietojamību.
- Nokopšanas tīrīšanas procesa validācija.
- Risku bazēta parametru diapazona novērtējums un eksperimentu plānošanas metode (DoE) procesa modelēšanā.
Pakalpojumu detaļas
Standartizētie proteīnu vai plazmīdu tīrīšanas platformas balstās uz vairākiem sākotnējiem tīrīšanas soļiem un mazāk kā četriem hromatogrāfijas soļiem, tostarp iegūšanu, starpniecisko tīrīšanu un finišu.
| Pakalpojumu detaļas |
Vienības operācijas |
Parametri |
| Sākotnējā tīrīšana |
Centrifužēšana |
Virtules ātrums, laiks |
| Augstspieduma homogenizācija |
Kopējais cieto daļu saturs, spiedums, cikli |
| Nepārtraukta alkalīna lize |
Atjaunojušo līdzekļa attiecība pret lizes risinājumu, lizes laiks |
| Tangenciālā plūsmas filtrācija |
Membrānas materiāls un caurulības izmērs, barojuma plūsmas ātrums, pārrobežas spiedums (TMP), filtrāta apjoma attiecība pret membrānu virsmas laukumu |
| Daudzums |
Dažadveida vielu tips un koncentrācija, pieskaitījums, pH, temperatūra, laiks |
| Denaturation un atvilkšana |
Iekļautās ķēdes proteīna disolubilizācija |
Denatūrējošās vielas koncentrācija (piem., Ureja, Guanidīna HCl, stiprs jonioziņu sāpes), Sāpju vielas (piem., Dodecilsvētlais sāls, SDS), Reducējošās vielas (piem., Ditiotretiol, DTT), Chelācijas vielas (Etilēndiamintetraaketoniksskābe, EDTA), Temperatūra, Laiks |
| Proteīnu atvietošana |
Atvietošanas metodes (dilūcija, dialīze vai SEC atvietošana), Proteīnu koncentrācijas, Buferi, pH, Temperatūra, Laiks, Oksidējošās un reducējošās vielas (piem., Glutatjons, GSH/Oksidētais glutatjons, GSSH, DTT/GSSH, Cisteīns/Cistīns), Maza veclaika pievienojumi (L-arginīns, Ureja, Guanidīns/HCl, un sāpju vielas) |
| Kapšana, vidēja tīrīšana un apjoma palielināšana |
AK (Afinācijas hromatogrāfija) |
Vairākas hromatogrāfijas šķiedras/kolonnas veida (piem., AK, JEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Kolonnas garums un diametrs, Bufera sastāvs, Ievietošanas tilpums, Mobilā fāzes sastāvs (Adsorpģija un Atslēgšana), pH, Plūsmas ātrums, Saistīšanas, Mazgāšanas un Atslēgšanas nosacījumi. |
| JEX (Anjona vai Kationa maiņas hromatogrāfija) |
| HIC (Hidrofobas interakcijas hromatogrāfija) |
| Dēsalinācija un/vai izmēru atdalīšanas hromatogrāfija (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatography) |
| MMC, Miša režīma hromatogrāfija |
Studija par praksi
CASE 1
Mums uzdoti uzdevumi attīstīt un optimizēt pēdējo tīrīšanas procesu, lai palielinātu oliecības tīrību no 85% līdz 90%, vienlaicīgi samazinot hromatogrāfijas soļus.
Yaohai nodrošināja drošu un masveida pielietojamu tīrīšanas procesu ar trīs hromatogrāfijas posmiem mērķa oliecībai, kas bija baktēriāla alerģēna. Galīgā tīrība sasniedza 95%.
CASE 2
Yaohai tika nomērota kā klienta pusi, lai optimizētu endotoksiņu noņemšanas procesu vīruslīdzīga daļiņas (VLP) vakcinai.
Mūsu komanda veica hromatogrāfijas parametru optimizāciju un sagatavoja vielu ar 98% tīrību un endotoksiņu atlikumu 12,8EU/mg.
Mūsu pieredze
- Mēs esam iesaistīti dažādu lielo molekulu, tostarp rekombinantu subvakuču vakcinu, VLP, hormonu (insulīns, GLP-1, augšanas hormons), citokīnu (Interleukīns-2/IL-2, IL-15, IL-21), augšanas faktoru (EGF, FGF, NGF), nanocorpju/vienkāršo domēnu anticorpju (sdAbs), enzīmu, utt., izstrādē un ražošanā.
Aprīkojums
Mēs izmantojam nozares priekšgalu AKTA Pure, AKTA Avant un preparatīvo HPLC sistēmas, lai veiktu dažādas hromatogrāfijas metodes, ieskaitot afinitātes, jonu maiņas, hidrofobās interakcijas, atpakaļfāzes un izmēru atdalīšanas hromatogrāfiju.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
