U usporedbi s enzimskim zatvaranjem u dva koraka, metoda kotranskripcijskog zatvaranja u jednom koraku može značajno smanjiti tijek procesa. Metoda je usmjerena na rezultate i uključuje dodavanje cap analoga reakciji in vitro transkripcije (IVT). Cap analozi mogu se uvesti na početku transkripcije, a mRNA s cap strukturom može se dobiti nakon završetka transkripcije. Trenutačni cap analozi treće generacije mogu izbjeći obrnuto ograničavanje i izravno dodati Cap 1 strukturu proizvodu transkripcije.
Za razmatranje imunogenosti mRNA in vivo i učinkovitosti prevođenja, IVT proces često usvaja određene vrste modificiranih NTP-ova, a uobičajeni modificirani nukleotidi su pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouri-din (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC) .
Slika: Dijagram mRNA ko-transkripcije i reakcije zatvaranja
Pojedinosti usluge
Servis | Pojedinosti usluge | Razdoblje isporuke (radni dan) |
Kotranskripcijsko ograničenje | In vitro transkripcijski odgovor (Clean Cap analog) | 1-2 |
| Nukleotidne modifikacije (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Uklanjanje DNK predloška (DNase I) |
Optimizacija uvjeta IVT - opcija | Projektiranje i optimizacija reakcijskih komponenti | 3-7 |
Naše značajke
- Raznovrsne strategije modifikacije nukleotida
Višestruke izborne strategije modifikacije nukleotida mogu poboljšati ekspresiju proteina.
- Optimizirani sustav reakcije
Postignite visok omjer transkripcije i visoku učinkovitost zatvaranja.
- Stabilni postupak zatvaranja
Postignite stopu ograničenja veću od 95%.
Učinkovito spriječite degradaciju mRNA strogom kontrolom RNaze u eksperimentalnom okruženju i potrošnom materijalu.
Case study
Yaohai Bio-Pharma izgradila je zrelu platformu procesa ko-transkripcijskog zatvaranja, koristeći čiste analogne poklopce za izravno dodavanje strukture Cap1 uz izbjegavanje obrnutog zatvaranja. Nakon standardizirane prethodne obrade uzorka i detekcije kapilarnom elektroforezom (CE), stopa zatvaranja mRNA poboljšanog zelenog fluorescentnog proteina (eGFP) može doseći više od 95%.
Učinkovitost zatvaranja eGFP mRNA veća od 95%
eGFP mRNA i mCherry mRNA pripremljene ko-transkripcijskim zatvaranjem transficirane su u 293T stanice, respektivno, a jak fluorescentni signal opažen je nakon 48 sati, što sugerira da se mRNA učinkovito eksprimira u 293T stanicama.
Ekspresija eGFP mRNA i mCherry mRNA u 293T stanici
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
