Što se tiče šaržne pripreme RNA prekursora, često korištena metoda je in vitro transkripcija (IVT). IVT reakcija koristi lineariziranu plazmidnu DNA koja sadrži T7 promotor kao predložak i sintetizira RNA prekursor s nukleozid trifosfatima (NTP) kao supstratom u prisutnosti T7 RNA polimeraze.
In vitro metode ciklizacije uključuju kemijsku ligaciju, enzimatsku ligaciju i metodu permutiranog intron-egzona (PIE). Kemijsko ligiranje i enzimsko ligiranje prikladni su za ciklizaciju kraćih RNA. Kada je fragment veći od 100 nt, stopa ciklizacije će se znatno smanjiti. Nasuprot tome, metoda nukleaze temeljena na PIE sustavu može postići ciklizaciju sekvenci od 8 kb.
Pod katalizom gvanozin trifosfata (GTP), PIE struktura prolazi kroz ciklizaciju ekstra-intronskih sekvenci. U kombinaciji s razumnom strategijom povećanja stope ciklizacije, Yaohai Bio-Pharma može postići ciklizaciju sekvenci do 4 kb, s učinkovitošću ciklizacije od više od 80%.
Reakcija ciklizacije RNA in vitro teče na sljedeći način:
Prekursor RNA sintetizira se in vitro transkripcijom, a PIE komponenta dovršava samospajanje pod katalizom GTP-a da bi nastala circRNA.
Pojedinosti o uslugama
| Proces | Pojedinosti usluge | Razdoblje isporuke (radni dan) |
| In vitro transkripcija i cirkulacija | Potvrda sustava reakcije | 1-2 |
| In vitro reakcije transkripcije i ciklizacije |
| RNaza R probava |
| Optimizacija reakcije | Sastav reakcije, optimizacija vremena | 2-5 |
Naše značajke
- Strogi testni dizajn i optimizacija
Može se postići do 4 kb ciklizacije RNK.
- Visoka učinkovitost ciklizacije
Stopa ciklizacije veća od 80% može se postići racionalnom strategijom optimizacije slijeda.
Kroz strogu kontrolu RNaza u eksperimentalnom okruženju i potrošnom materijalu, degradacija RNK je učinkovito spriječena.
Case study
In vitro ciklizacija i obogaćivanje circRNA
Na temelju PIE sustava, Yaohai Bio-Pharma je optimizirala sekvencu circRNA, sa stopom ciklizacije od više od 80% elektroforezom u agaroznom gelu (AGE). Upotrebom RNaze R za obogaćivanje circRNA, rezultati E-gel elektroforeze pokazuju da je linearni prekursor RNA probavljen, a nakon daljnjeg pročišćavanja, većina izrezane circRNA može se ukloniti. Otopinu za pročišćavanje sama je razvila tvrtka Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulacija i obogaćivanje circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
