Prilagođena sinteza saRNA
Samopojačavajuća mRNA (saRNA), također poznata kao replikonska RNA, kodira in vitro transkripciju (IVT) mRNA sekvence i gene virusne replikaze izvedene iz alfavirusa ili flavivirusa. Geni virusne replikaze dopuštaju samoamplifikaciju mRNA, što rezultira povećanom ekspresijom proteina i minimalnom potrebnom dozom RNA u usporedbi s mRNA koje se ne pojačavaju. Drugi aspekt je da je saRNA relativno velika molekula (više od 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma je uspostavio skup tehnologija sinteze mRNA za pružanje ne-amplificirajuće mRNA i samo-amplificirajuće mRNA (1000 nt~14000 nt), kao što su dizajn sekvence i optimizacija, IVT, pročišćavanje, liofilizacija i enkapsulacija lipidnih nanočestica (LNP). . Svi proizvodi puštaju se u promet prema strogim standardima kontrole kvalitete.
Slika 1. Strukturne značajke IVT mRNA: konvencionalna, kružna i samopojačavajuća mRNA.
Značajke sekvenci samopojačavajuće mRNA
Samopojačavajuća RNA sastoji se od četiri nestrukturna proteina (označenih kao nsP1, nsP2, nsP3 i nsP4), koji su izvedeni iz alfavirusa, virusa venezuelanskog konjskog encefalitisa (VEEV). Među njima, nsP1 pokazuje dvostruke enzimske aktivnosti, naime GTase i N7MTase, dok nsP2 posjeduje RTPase aktivnost, ključnu za ograničavanje IVT mRNA za generiranje Cap 0 strukture. Osim toga, nsP2 služi kao proteaza i helikaza, olakšavajući zamršenu obradu cijelog nsP kompleksa. Točna funkcija nsP3 ostaje nedokučiva, ali on ulazi u interakcije s različitim proteinima stanica domaćina, čime pridonosi slabljenju antivirusnog odgovora koji postavlja domaćin.
Regija alfavirusnog subgenomskog promotora (SGP) nalazi se prije gena od interesa (GOI). SGP element olakšava inicijaciju GOI transkripcije zaobilazeći čitanje sekvence koja kodira virusne nsP proteine.
Slika 2. Sinteza i stanični testovi eGFP saRNA platforme Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Prilagođena rješenja saRNA
Protokol sinteze saRNA je sličan mRNA: Prilagođena sinteza mRNA
- Dizajn sekvence
- Priprema plazmidskog uzorka
- in vitro transkripcija (IVT)
- mRNA Enzymatic Capping
- mRNA Co-transkripcija Capping
- Pročišćavanje mRNA
- Liofilizacija mRNA
- LNP enkapsulacija
- Analiza i testiranje
HR
EN
AR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
