Stanični testovi potencije
Značaj testa potencije mRNA
S brzim razvojem mRNA cjepiva i terapeutika, potreban je poseban panel analitičkih metoda za testiranje potencije (definiranje njihove biološke aktivnosti), uključujući učinkovitost translacije mRNA. Ove metode se tipično temelje na transfekciji stanica i funkcionalnim ispitivanjima ciljanog proteina.
Yaohai Bio-Pharma nudi stanične testove potencije za mRNA ljekovite tvari ili LNP proizvode, uključujući transfekciju stanica (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 stanice, itd.) i ELISA ili Western Blotting (WB) testove.
Regulatorni zahtjevi za testove potencije
Prema regulatornim razmatranjima WHO-a, „Jačina svake serije konačnog cjepiva treba se odrediti korištenjem odgovarajuće kvantitativne i validirane funkcionalne metode. Potencijalni in vitro testovi potencije mogu uključivati stanične sustave transfekcije ili testove bez stanica.” A USP je preporučio "stanični test" za testiranje snage mRNA, tj. ekspresije ciljnog proteina.
Analitička metoda
|
Analiza
|
Metode
|
|
Testovi potencije
|
Transfekcija temeljena na stanicama i ciljni protein identificiraju:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 stanice itd.
|
Postupak
Korak 1. Stanična transfekcija s mRNA ili mRNA-LNP
Stanice se uzgajaju i transficiraju s mRNA ili mRNA-LNP. Detaljnije, mRNA se transfecira nakon što se pomiješa s transfekcijskim reagensom, dok se mRNA-LNP izravno transfecira u stanice. Nakon 24-48 sati, razbistrite supernatant koji sadrži eksprimirani protein centrifugiranjem.
Korak 2. Funkcionalni testovi ciljnog proteina
Provedite ELISA ili WB testove za procjenu funkcionalnog vezanja ciljnih proteina.
Studija slučaja
Stanični testovi potencije uzoraka mRNA
Yaohai-BioPharma je razvila metodu ispitivanja potencije mRNA koja se temelji na stanicama, uključujući stanične kulture, transfekciju stanica i funkcionalne testove proteina. Transficirali smo eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferazu mRNA, spike protein mRNA u 293T stanice i detektirali ciljni protein putem fluorescencije, luminiscentnog ili obojenog signala, WB, ELISA.
Stanični testovi potencije mRNA proizvoda Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
