Priprema CircRNA zahtijeva linearnu RNA kao prekursorski materijal (RNA prekursor) za ciklizaciju, pri čemu se RNA prekursor obično priprema korištenjem linearizirane plazmidne DNA kao transkripcijske šablone i transkribira in vitro uz pomoć T7 RNA polimeraze.
Plazmidna DNA visoke kvalitete neophodna je za in vitro transkripciju (IVT). Na temelju zrele platforme usluge pripreme plazmida, Yaohai Bio-Pharma može pružiti usluge pripreme visoke čistoće i standardne linearizirane plazmidne DNA (pDNA) kako bi se osigurao integritet IVT proizvoda.
Pojedinosti o uslugama
| Proces | Dodatna usluga | Pojedinosti usluge | Razdoblje isporuke (radni dan) |
| Priprema kružnog plazmida | Sinteza gena | Sinteza gena (treća strana) | 7-10 |
| Pojačanje plazmida | Pojačanje plazmida | 2 |
| Ekstrakcija plazmida |
| Linearizirana priprema plazmida | Linearizacija i pročišćavanje plazmida | Linearizacija plazmida | 1 |
| Linearizacija pročišćavanja DNA |
| Kontrola kvalitete plazmidne DNA | Čistoća koncentracije | Ultraljubičasta (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
| Konformacija plazmida | Elektroforeza u agaroznom gelu (AGE) |
| Kapilarna elektroforeza (CE)-po izboru |
| Identifikacija plazmida | Identifikacija restrikcijskih enzima/ AGE |
Naše značajke
Fleksibilan odabir metoda linearizacije
Optimizacija ekstrakcije DNA i metoda pročišćavanja za postizanje visokih stopa oporavka.
- Stroga kontrola kvalitete
Strogi standardi kontrole procesa, sa stopom superhelikalne konformacije uzoraka plazmida za istraživanje od preko 80%.
Visoki standard i visoko učinkovite usluge pripreme plazmida i kontrole kvalitete za ispunjavanje eksperimentalnih potreba.
Case study
Uzimajući proizvod Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA kao primjer, superzavojni omjer uzoraka plazmida transkripcijskih predložaka (razina istraživanja) je više od 70%, sa stopom linearizacije od blizu 100%.
mCherry circRNA je pripremljena s lineariziranim plazmidom kao predloškom i transficirana u 293T stanice. Visoka razina ekspresije fluorescencije (crvena fluorescencija) detektira se nakon 24 sata od transfekcije, koja će se pojačati nakon 48 sati, a još uvijek se može detektirati 7. dan i 14. dan nakon transfekcije.
Protein mCherry se stabilno i učinkovito eksprimira, a čistoća transkripcijskog predloška može zadovoljiti zahtjeve za circRNA lijekom (DP) visoke kvalitete.
In vitro validacija ekspresije mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
