Prema centralnom dogmatu, pošiljateljska RNA (mRNA) je most za prenos genetskog materijala od DNA do proteina.
mRNA izvodi biološku ulogu kodirajući proteine u živome tijelu, a zrelija mRNA kod eukariotskih organizama sastoji se od pet komponenti: 5' Kap (kap struktura), 5' UTR (ne-kodirajući područje), ORF (otvoreni čitački okvir), 3' UTR i 3' poliA rep (polid adenilatni rep).
Detalji usluga
| Proces |
Opcionalna usluga |
Detalji usluge |
Rok isporuke (Dan) |
| dizajn i Optimizacija mRNA Niza |
Dizajn i optimizacija kodirajućih nizova |
Poravnanje CDS niza
Optimizacija kodona CDS
|
1 |
| Dizajn i optimizacija nekodirajućih nizova |
dizajn i optimizacija niza 5' UTR
dizajn i optimizacija niza 3' UTR
dizajn i optimizacija niza polyA
|
1-2 |
Opcije za prilagodbu
| 5' UTR/3' UTR |
- Prirodni UTR niz
- Mutirani/Proučeni UTR niz
|
| 3' PoliA rep |
- 100A ~120A rep (preporučeno)
- Segmentirani poliA rep
- Ostali prilagođeni repovi
|
Uobičajene strategije za dizajn mRNA niza
| komponente mRNA |
Biološke funkcije |
Strategije optimizacije |
| 5' Kap |
Zaštićuje mRNA od degradacije eksonukleazama i djeluje u suradnji s poliA repom na 3' kraju, poliA vezivnim proteini i proteini za početak prijevoda kako bi pokrenuli prijevod proteina. |
Prirodna Cap1 struktura izbjegava receptore za prepoznavanje uzoraka te time smanjuje prirodnu imunsku odgovornost, što se može postići jednoetapnim kod-transkripcijskim kapiranjem ili dvooetapnim enzimatskim kapiranjem [pogledajte detalje o enzimatskom kapiranju mRNA i kod-transkripcijskom kapiranju]. |
| 5' UTR |
5' UTR može biti prepoznat od strane ribozoma, regulirati prijevod mRNA i utjecati na stabilnost mRNA. |
Sadrže Kozakove sekvence bez vrlo stabilne sekundarne strukture. Prirodni UTR-ovi visoko izraženih gena su preferirani za transkripciju in vitro (IVT) mRNA kao što su α-globin i β-globin. |
| CDS |
Regije kodiranja proteina i kodirajuće nizova za antigene, antitijele ili druge funkcionalne proteine. |
Optimizacija kodona povećava razinu translacije, uz napomenu da određeni neoptimalni kodoni mogu imati ulogu u zavijanju proteina. |
| 3' UTR |
Upravljaju translacijom mRNA i stabilnošću. |
Prirodni UTR-ovi visoko izraženih gena su poželjni za IVT mRNA-e kao što su α-globin i β-globin. |
| 3' polyA rep |
Upravljaju izrazom proteina i štite kap strukturu od degradacije. |
Potrebna je odgovarajuća duljina (100-150 bp); kodiranje poliA repa na plazmidu transkripcijske šablonice osigurava definiraniju duljine poliA repa. |
Naše značajke
- Odabir izvora UTR-a s različitim sadržajem
Više izvora visoko izraženih prirodnih i modifikovanih UTR biblioteka; zrelija strategija modifikacije UTR-a;
- Ekipa za optimizaciju CDS na vrhu tehnologije
Suradnja s profesionalnom ekipom algoritama umjetne inteligencije kako bi se dovršila optimizacija kodona.
- Jednoliko raspodjeljeni polyA repovi
Dodavanje polyA nizova prema DNA šablonima kako bi se mRNA duljina kontrolirala preciznije.
- Raznovrsne kombinacije optimizacije
Postignuti učinkovit izraz mRNA s niskom imunogeničnošću.
Studija slučaja
Dizajn dvostrukog reportera mRNA: mCherry-eGFP mRNA
Yaohai Bio-Pharma usluga mRNA se stalno nadograđuje dizajnom i optimizacijom dvostrukog reporter gena tandem niza, što omogućuje zajednički izraz dva gena.
Korištenjem konvencionalnog transfekcione reagensa, dvostruki gen tandem niz mCherry-eGFP mRNA transficira se u 293T stanice, a otkrivaju se dvije fluorescentske emisije, mCherry (crvena) i pojačana zelena fluorescentska proteina (eGFP), nakon 48 sati uz istodoban izraz, a složeni grafikon je istaknut žutim bojom.
Izraz mCherry-eGFP mRNA u 293T stanici
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
