Plazmidna DNA, kao u vitro transkripcija (IVT) šablon, je važan sirovina za proizvodnju mRNA. Visoka dobivenost, visoka čistoća i visoka oporava plazmidske DNA su glavni cilj tijekom razvoja procesa plazmida.
Yaohai Bio-Pharma pruža jednoznačno rješenje za razvoj plazmida, uključujući gornjezvan (fermentacija), dolnezvan (čišćenje) razvoj procesa, karakterizaciju procesa i validaciju procesa. Imamo obiman iskustva u poboljšanju dobivenosti plazmida i njegovog izdvajanja iz složenih matrica razvijanjem i optimiziranjem procesa fermentacije, čišćenja i uklanjanja nepoželjnih tvari.
Osnovni bioproces za proizvodnju plazmida uključuje: Escherichia coli (E. coli) fermentaciju, skupljanje stanica i alkalnu lizu, očišćavanje, koncentraciju, trokorak proces hromatografije (uhvaćanje, srednje čišćenje i finalno čišćenje), te koncentraciju.
Detalji usluge | Jedinice operacija | Parametri |
E. coli fermentacija |
Tresnja fiale | Sastav sredstava, antibiotik, volumen inokuluma, temperatura rasta i druge. |
Fermentor (7 L) |
Antibiotik, volumen inokuluma, temperatura rasta, pH, otopljeni kisik (DO), način davanja (npr., fed-batch), hrana za fermentaciju, vrijeme fermentacije i druge. |
|
Skupljanje stanica | Mikrofiltracija | Standard E. coli postupak skupljanja |
Lizis stanica | Rezuspencioniranje stanica, alkalna liža, neutralizacija | Omjer alkalne tvari, vrijeme liže |
Prosvijećivanje | Filtriranje | Pruva filtracija, 20 µm i 5 µm filter (poželjno) |
Koncentracija | Ultrafiltracija, tangencijalna toka filtracije | Veličina rupa (ili NMWC), Transmembrana pritisak (TMP), Flux, omjer volumena filtrata do površine membrane |
Trokoraka hromatografija | Hromatografija po veličini (SEC) ili gel filtracijska hromatografija (GFC) | Duljina i promjer kolone, sastav bufera, volumen zahtjeva, sastav mobilne faze (adsorpcija i desorpcija), pH, brzina toka, uvjeti ravnoteže, vezivanja, pražnjenja i eluciranja. |
Afini hromatografija (AF) | ||
Anionski izmjenični hromatografija (AEX) | ||
Koncentracija | Ultrafiltracija, tangencijalna toka filtracije | Veličina rupa (ili NMWC), Transmembrana pritisak (TMP), Flux, omjer volumena filtrata do površine membrane |
Više rješenja za proces očišćavanja bioloških molekula |