kapiranje na 5'-kratku je ključna modifikacija mRNA. mRNA s kap strukturama, posebice Cap1 strukturama, omogućuju da mRNA izbjegnu prirodne imunološke odgovore in vivo, što rezultira učinkovitim prevođenjem proteina.
Enzimatsko kapiranje (dvokorak metoda) je konvencionalna metoda kapiranja mRNA, slična procesu kapiranja u eukariotskim organizmima. Pod djelovanjem niza enzima, 7-metilguanin (m7G) povezuje se s 5'-kratkim krajevima mRNA kroz 5'-5' trijfosfatnu vezu i podvrgava se metilacijskoj modifikaciji kako bi se formirao kap struktura Cap 1 (m7GpppN).
Dijagram oblikovanja prirodnih kap struktura
Toka enzimatskog kapiranja reakcije je sljedeći:
Linearizirana plazmidna DNA koristi se kao šablon za transkripciju in vitro (IVT) u prisutnosti T7 polimeraze, a mRNA s 5'-kap strukturom formira se nakon jednokratne čišćenja pomoću vakcinijanske kapiranje enzima i 2'-O-metiltranzferaze.
Detalji usluga
Opcionalna usluga |
Detalji usluge |
Rok isporuke (Dan) |
enzimatsko zaključivanje mRNA |
Enzimatska zaključna reakcija |
1 |
Optimizacija zaključne reakcije - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti reakcije |
3~7 |
Naše značajke
- Dizajn i optimizacija komponente zaključne reakcije
Komponenta zaključne reakcije je optimizirana, a proizvodnja mRNA transkripta je znatno povećana.
- Verifikacija in vitro izražavanja
Zaključeni mRNA se transficira u 293T stanice, a izražavanje ciljnog proteina može biti otkriveno.
Putem stroge kontrole RNase u eksperimentalnom okruženju i potrošnji, degradacija mRNA je učinkovito sprečena.
Studija slučaja
MRNA platforma Yaohai Bio-Pharma je izgradila savršen proces zaključne reakcije.
Za eGFP mRNA, pre-proizvod mRNA pripremljen enzimatskim zakupljanjem, može se poslije transfekcije 293T stanica za 24 sata promatrati jači fluorescentski signal eGFP-a (zeleno fluorescenca), što se otkriva pomoću Western Blot (WB), čime se pokazuje da se ciljni protein pojačana zelena fluorescentska proteina (eGFP) može učinkovito izraziti in vitro.
Izraz Enzimatski Zakupljene eGFP mRNA u 293T Stanicama
HR
EN
AR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
