U usporedbi s dvostepnim enzimatskim cappingom, jednostepna co-transkripcijska metoda može značajno smanjiti procesni tok. Metoda je rezultat-oriëntirana i uključuje dodavanje kap analoga u reakciju in vitro transkripcije (IVT). Kap analozi mogu biti uvijeni na početku transkripcije, a mRNA s kap strukturom može se dobiti nakon završetka transkripcije. Trenutni treći generacije kap analozi mogu izbjegavati obrnuti capping i direktno dodavati Cap 1 strukturu transkripcijskom produktu.
Za razmatranja imunogeneznosti mRNA u živome tijelu i učinkovitosti prijevoda, proces IVT često koristi određene vrste modifikovanih NTP-a, a uobičajeni modifikovani nukleotidi su pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC).
Slika: Dijagram mRNA Co-transkripcijske i Capping Reakcije
Detalji usluge
Usluga |
Detalji usluge |
Rok Izrade (radni dan) |
Co-transkripcijsko capping |
Transkripcijska odgovorna u vitro (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Modifikacije nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Uklanjanje DNS šablon (DNase I) |
Optimizacija uvjeta IVT-a - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti reakcije |
3-7 |
Naše značajke
- Raznovrsne strategije modifikacije nukleotida
Više opcionalnih strategija modifikacije nukleotida može poboljšati izraz proteina.
- Optimizirani reakcijski sustav
Postignite visoki omjer transkripcije i visoku učinkovitost zaklapanja.
- Stabilni proces zaklapanja
Postignite stopu zaklanja veću od 95%.
Učinkovito sprečite degradaciju mRNA strogim kontrolom RNaze u eksperimentalnom okruženju i potrošačkim materijalima.
Studija slučaja
Yaohai Bio-Pharma je izgrađena zrela platforma za zaklanje tijekom transkripcije, koristeći čist cap analog kako bi se Cap1 struktura dodala direktno, izbjegavajući obrnuto zaklanje. Nakon standardiziranog prijeloma uzorka i detekcije kapilarne elektroforezom (CE), stopa zaklanja pojačanog zelenog fluorescentskog proteina (eGFP) mRNA može dostići više od 95%.
efikasnost zaklanja eGFP mRNA više od 95%
EGFP mRNA i mCherry mRNA pripremljene zaklanjem tijekom transkripcije transfirane su u 293T stanice, redom, a jačan fluorescentski signal opažen je nakon 48 sati, što ukazuje na to da se mRNA učinkovito izražava u 293T stanicama.
Izraz eGFP mRNA i mCherry mRNA u 293T stanici
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
