U vezi masovnog proizvodnje mRNA, transkripcija in vitro (IVT) je učinkovitiji i zrelij metod. Reakcija IVT koristi linearizirani plazmidni DNA koji sadrži T7 promotor kao šablon, a mRNA sintetizira se s nukleotidnim trifosfatima (NTPs) kao substratima u prisutnosti T7 RNA polimeraze.
Modifikacija nukleotida je prekid u istraživanju mRNA, gdje su neizmijenjeni mRNA molekuli prepoznati od strane intracelularnih senzora RNA za aktiviranje prirodnog imunog sistema. Iz razloga in vivo imunogenosti mRNA i učinkovitosti translacije, proces IVT obično koristi određene vrste modifikovanih NTP-a, a česte modifikovane nukleotide su pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC).
Proces transkripcije in vitro mRNA
Dijagram reakcije transkripcije in vitro (IVT)
Detalji usluga
Opcionalna usluga |
Detalji usluge |
Rok Izrade (radni dan) |
Transkripcija in vitro (IVT) |
IVT, Transkripcija in vitro |
1 |
| Modifikacije nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC, itd.) |
| Uklanjanje DNS šablon (DNase I) |
Optimizacija uvjeta IVT-a - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti IVT reakcije |
2-5 |
Naše značajke
- Raznovrsne strategije modifikacije nukleotida
Poboljšanje stabilnosti mRNA i izražavanja proteina in vivo.
- Strog dizajn i optimizacija testa
priprema fragmenata mRNA do 10kb moguće je ostvariti.
Optimizacijom uvjeta reakcije IVT, brzina transkripcije može biti do 1:200.
Strog kontroliranje RNase kroz eksperimentalnu atmosferu i potrošnje može učinkovito sprečiti degradaciju mRNA.
Studija slučaja
Trenutačni sustav IVT reakcije je otprilike optimiziran za sintetičke sustave duljine oko 100 nt, ne za mRNA proizvoljne duljine. Čim je mRNA niz duži, teže ga je transkribirati i čim je više podložan degradaciji.
Kako bi se pripremili prilagođeni mRNA nizovi duljine oko 10 kb, Yaohai Bio-Pharma je uspješno pripremio visokokvalitnete uzorke s visokim omjerom transkripcije od 1:135 i dobio 135 μg početno očišćenih mRNA produkata nakon što je 1 μg lineariziranog plazmita bio transkribiran in vitro kroz strogo eksperimentalno dizajniranje, neprestano optimiziranje uvjeta reakcije i strogi kontroliranje RNase.
identifikacija mRNA (elektroforeza na agarosnom gełu)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
