Prilagođena saRNA sinteza
Samoopćujući mRNA (saRNA), također poznat kao replikonski RNA, kodira sekvence in vitro transkripcije (IVT) mRNA i virske genove replicaze izvedene od alfavirusa ili flavivirusa. Virski genovi replicaze omogućuju samoopupčivanje mRNA, što rezultira povećanom ekspresijom proteina i minimalnom potrebnom dozom RNA u usporedbi s nepopupčujućim mRNA-ovima. Osim toga, saRNA je relativno velika molekula (više od 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma je razvila seriju tehnologija za sintezu mRNA-a kako bi pružila nepopupčujući mRNA i samoopupčujući mRNA (1000 nt~14000 nt), poput dizajna i optimizacije sekvenci, IVT, čišćenja, liofilizacije i encapsulacije lipidnim nanoparticulama (LNP). Sva proizvodstva su oslobodjena pod strogo kontroliranim kvalitetnim standardima.
Slika 1. Strukturne značajke IVT mRNA-ova: Konvencionalni, Krugli i Samoopćujući mRNA.
Sequencijske značajke samoopupčujućeg mRNA
Samoopčivajući RNA se sastoji od četiri ne-strukturna proteina (označena kao nsP1, nsP2, nsP3 i nsP4), koji su izvedeni iz alfavirusa, posebno iz venezuelskog konjeg encefalitisnog virusa (VEEV). Među njima, nsP1 izražava dvostruku enzimsku aktivnost, a to su GTaza i N7MTaza, dok nsP2 posjeduje RTPaznu aktivnost, ključnu za stvaranje Cap 0 strukture prilikom zaklapanja IVT mRNA. Također, nsP2 djeluje kao proteaza i helikaza, što olakšava složeno obradivanje cjelokupnog nsP kompleksa. Tačna funkcija nsP3 još uvijek nije potpuno razumljiva, ali se uključuje u interakcije s različitim proteinićima domaće stanice, doprinoseći smanjenju antiviralne odgovore domaće stanice.
Regija podgenomskog promotor-a (SGP) alfavirusa nalazi se prije gena od interesa (GOI). SGP element omogućuje pokretanje transkripcije GOI preskačući čitanje niza koji kodira virusske nsP proteine.
Slika 2. Sinteza i celulare asese eGFP saRNA na platformi RNASci Yaohai Bio-Pharma.
Prilagođena rješenja za saRNA
Protokol sinteze saRNA je sličan onom za mRNA: Prilagođena sinteza mRNA
- Dizajn niza
- Priprema plazmidnog šablon
- transkripcija in vitro (IVT)
- enzimatsko zaključivanje mRNA
- kovalentno zaključivanje mRNA tijekom transkripcije
- čišćenje mRNA
- liofilizacija mRNA
- LNP inkapsulacija
- Analiza i testiranje
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
