Für die CircRNA-Herstellung wird lineare RNA als Vorläufermaterial (RNA-Vorläufer) für die Zyklisierung benötigt, wobei der RNA-Vorläufer üblicherweise unter Verwendung linearisierter Plasmid-DNA als Transkriptionsvorlage hergestellt und in vitro mit Hilfe der T7-RNA-Polymerase transkribiert wird.
Hochwertige Plasmid-DNA ist für die In-vitro-Transkription (IVT) unerlässlich. Basierend auf der ausgereiften Serviceplattform für die Plasmidpräparation kann Yaohai Bio-Pharma einen Service zur Präparation hochreiner und standardisierter linearisierter Plasmid-DNA (pDNA) anbieten, um die Integrität von IVT-Produkten sicherzustellen.
Details zu den Dienstleistungen
| Prozess | Optionaler Service | Service Details | Lieferzeit (Werktage) |
| Herstellung zirkulärer Plasmide | Gensynthese | Gensynthese (Drittanbieter) | 7-10 |
| Plasmidamplifikation | Plasmidamplifikation | 2 |
| Plasmidextraktion |
| Linearisierte Plasmidpräparation | Plasmidlinearisierung und -reinigung | Plasmidlinearisierung | 1 |
| Linearisierung DNA-Reinigung |
| Plasmid-DNA-Qualitätskontrolle | Konzentration Reinheit | Ultraviolett (UV)-Spektrophotometrie | 1-2 |
| Plasmidkonformation | Agarosegelelektrophorese (AGE) |
| Kapillarelektrophorese (CE)-optional |
| Plasmid identifizieren | Identifizierung von Restriktionsenzymen/ AGE |
Unsere Eigenschaften
Flexible Auswahl von Linearisierungsmethoden
- Hohe Wiederherstellungsrate
Optimierung der DNA-Extraktions- und Reinigungsmethoden zur Erzielung hoher Rückgewinnungsraten.
- Strenge Qualitätskontrolle
Strenge Prozesskontrollstandards mit einer superhelikalen Konformationsrate von Plasmidproben für Forschungszwecke von über 80 %.
- Ausgereifter Plattformprozess
Hochwertige und hocheffiziente Plasmidpräparation und Qualitätskontrolldienste zur Erfüllung experimenteller Anforderungen.
Fallstudie
Am Beispiel des Produkts mCherry circRNA von Yaohai Bio-Pharma liegt das Supercoiled-Verhältnis der Transkriptions-Template-Plasmidproben (Forschungsqualität) bei über 70 %, bei einer Linearisierungsrate von nahezu 100 %.
mCherry circRNA wird mit linearisiertem Plasmid als Vorlage hergestellt und in 293T-Zellen transfiziert. 24 Stunden nach der Transfektion wird ein hohes Maß an Fluoreszenzexpression (rote Fluoreszenz) festgestellt, das nach 48 Stunden verstärkt wird und am 7. und 14. Tag nach der Transfektion immer noch nachweisbar ist.
Das mCherry-Protein wird stabil und effizient exprimiert und die Reinheit der Transkriptionsvorlage kann die Anforderungen an circRNA-Arzneimittelprodukte (DP) in hoher Qualität erfüllen.
In-vitro-Expressionsvalidierung von mCherry circRNA
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