Gemäß dem zentralen Dogma ist die Messenger-RNA (mRNA) die Brücke für die Übertragung des genetischen Materials von der DNA auf die Proteine.
mRNA spielt eine biologische Rolle, indem sie Proteine in vivo kodiert, und reife mRNA in eukaryotischen Organismen besteht aus fünf Komponenten: 5'-Cap (Cap-Struktur), 5'-UTR (nicht-kodierende Region), ORF (offener Leserahmen), 3'-UTR und 3'-PolyA-Schwanz (Polyadenylatschwanz).
Prozess | Optionaler Service | Service Details | Lieferzeitraum (Tag) |
mRNA-Sequenzdesign und -optimierung | Design und Optimierung von Codierungssequenzen | CDS-Sequenzausrichtung CDS-Codon-Optimierung | 1 |
Design und Optimierung nichtkodierender Sequenzen | 5'-UTR-Sequenzdesign und -optimierung 3'-UTR-Sequenzdesign und -optimierung Design und Optimierung von PolyA-Sequenzen | 1-2 |
5' UTR/3' UTR |
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3' PolyA-Schwanz |
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mRNA-Komponenten | Biologische Funktionen | Optimierungsstrategien |
5' Kappe | Schützt mRNA vor dem Abbau durch Exonukleasen und wirkt zusammen mit dem PolyA-Schwanz am 3'-Ende, dem PolyA-Bindungsprotein und dem Translationsinitiationsfaktor-Protein, um die Proteintranslation zu initiieren. | Die natürliche Cap1-Struktur vermeidet Mustererkennungsrezeptoren und reduziert somit die natürliche Immunantwort, was durch eine einstufige co-transkriptionelle Kappe oder eine zweistufige enzymatische Kappe erreicht werden kann (Einzelheiten finden Sie unter mRNA-enzymatische Kappe und co-transkriptionelle Kappe). |
5' UTR | Die 5'-UTR kann von Ribosomen erkannt werden, reguliert die Translation von mRNA und beeinflusst die Stabilität von mRNA. | Enthalten Kozak-Sequenzen ohne sehr stabile Sekundärstruktur. Natürliche UTRs hochexprimierter Gene werden für In-vitro-Transkription (IVT)-mRNAs wie α-Globin und β-Globin bevorzugt. |
CDS | Proteinkodierende Regionen und kodierende Sequenzen für Antigene, Antikörper oder andere funktionelle Proteine. | Durch die Codon-Optimierung wird der Translationsgrad erhöht, wobei zu beachten ist, dass bestimmte nicht optimale Codons bei der Proteinfaltung eine Rolle spielen können. |
3' UTR | Reguliert die mRNA-Translation und -Stabilität. | Natürliche UTRs von hochexprimierten Genen wie α-Globin und β-Globin werden für IVT-mRNAs bevorzugt. |
3' PolyA-Schwanz | Regulieren Sie die Proteinexpression und schützen Sie die Kappenstruktur vor Abbau. | Eine angemessene Länge (100–150 bp) ist erforderlich. Durch die Kodierung des PolyA-Schwanzes auf dem Transkriptions-Vorlagenplasmid wird eine besser definierte Länge des PolyA-Schwanzes gewährleistet. |
Mehrere Quellen hochexprimierter natürlicher und modifizierter UTR-Bibliotheken; ausgereifte UTR-Modifizierungsstrategie;
Arbeiten Sie mit einem professionellen KI-Algorithmenteam zusammen, um die Optimierung der Codons abzuschließen.
Fügen Sie PolyA-Sequenzen gemäß DNA-Vorlagen hinzu, um die mRNA-Länge präziser zu steuern.
Erreichen Sie eine effiziente Expression von mRNA mit geringer Immunogenität.
Sequenzdesign einer Dual-Reporter-mRNA: mCherry-eGFP-mRNA
Der mRNA-Service von Yaohai Bio-Pharma wird durch die Entwicklung und Optimierung einer Doppelreportergen-Tandemsequenz, die eine Koexpression dualer Gene ermöglicht, kontinuierlich verbessert.
Mithilfe eines herkömmlichen Transfektionsreagenz wird die Doppelgen-Tandemsequenz mCherry-eGFP-mRNA in 293T-Zellen transfiziert und nach 48 Stunden werden zwei Fluoreszenzsignale von mCherry (rot) und verstärktem grün fluoreszierendem Protein (eGFP) mit gleichzeitiger Expression erkannt, und das gestapelte Diagramm ist gelb hervorgehoben.
Expression von mCherry-eGFP-mRNA in 293T-Zellen