mRNA-Prozessentwicklung

Zirkuläre Plasmid-DNA (pDNA), als Ausgangsmaterial, sollte vollständig linearisiert werden, um ein RNA-Transkript definierter Länge zu erzeugen.
Als gängige Synthesestrategie für RNA-Moleküle In-vitro-Transkription (IVT) ermöglicht es uns, maßgeschneiderte Transkripte effizient zu erhalten. IVT ist eine komplexe Reaktion, die eine Mischung aus DNA-Vorlage, RNA-Polymerase, RNase-Inhibitor, anorganischer Pyrophosphatase, Co-Faktoren, unmodifizierten oder modifizierten Nukleosidtriphosphaten (NTPs) und Puffer erfordert, um mRNA-Transkripte zu produzieren. Die ideale RNA-Ausbeute kann nicht mit einer einzigen Lösung erreicht werden, da sie von verschiedenen Reaktionsfaktoren abhängt. Darüber hinaus kann die IVT-Reaktion sequenzabhängig sein.
Nach der IVT-Reaktion wird der produkt- und prozessbedingte Verunreinigungen (z. B. dsRNA, verkürzte RNA-Fragmente, DNA-Vorlage, NTPs und RNA-Polymerase) sollten entfernt werden, um reine mRNA als aktiven pharmazeutischen Inhaltsstoff (API) zu erhalten.

Zu unseren verfügbaren allgemeinen mRNA-Prozessentwicklungsdiensten gehören:

Qualität durch Design (QbD)

Design of Experience (DoE)

Ein Faktor nach dem anderen (OFAT)

Service Details	Einheitsbetrieb	Parameter
Einzelenzymverdauung	Verdauungsreaktion	Reaktionskomponenten, Volumen, Drehzahl
Linearisierte DNA-Reinigung	IEX, Anionen- oder Kationenaustauschchromatographie	Arten von Chromatographieharzen/-säulen, Pufferzusammensetzung, Zusammensetzung der mobilen Phase, pH-Wert, Flussrate, Bindungs-, Wasch- und Elutionsbedingungen.
Linearisierte DNA-Reinigung	RPC, Umkehrphasenchromatographie
mRNA-Synthese durch IVT	IVT-Reaktion	IVT-Reaktionskomponenten, Volumen, Drehzahl, IVT-Zeit
mRNA-Synthese durch IVT	DNA-Entfernung	DNase-Konzentration
Enzymatisches Capping	Capping-Reaktion	Reaktionskomponenten, Volumen, Drehzahl
mRNA-Reinigung	AC, Affinitätschromatographie	Verschiedene Arten von Chromatographieharzen/-säulen (z. B. AC, IEX, RPC, SEC, MMC), Pufferzusammensetzung, Injektionsvolumen, Zusammensetzung der mobilen Phase (Adsorption und Desorption), pH-Wert, Flussrate, Bindungs-, Wasch- und Elutionsbedingungen.
	IEX, Anionen- oder Kationenaustauschchromatographie
	SEC, Entsalzung und/oder Größenausschlusschromatographie
	RPC, Umkehrphasenchromatographie
	MMC, Mixed-Mode-Chromatographie
	Tangentialflussfiltration	Membranmaterial und Porengröße, Zulaufflussrate, Transmembrandruck (TMP), Verhältnis Filtratvolumen zu Membranfläche