Grundlage der Verkapselung ist die Entwicklung und der Entwurf des Abgabesystems. Ein gut konzipiertes Abgabesystem ermöglicht es circRNA-Molekülen, in den Körper einzudringen, ohne von RNA-Enzymen abgebaut zu werden, und sie dann effektiv an die Zielstelle zu bringen, die Zellmembran zu durchdringen und intrazellulär freigesetzt zu werden.
Lipidnanopartikel (LNPs) sind das beste verfügbare Transportsystem und bieten Vorteile in Bezug auf Verkapselung, In-vivo-Expression und In-vivo-Sicherheit im Vergleich zu anderen Transportsystemen. LNPs mit Nukleinsäurefragmenten werden leicht von Zellen aufgenommen und bilden intrazelluläre Körper. Sobald sie in die Zelle gelangen, protoniert die saure Umgebung des intrazellulären Körpers den Kopf des ionisierten Lipids und lädt ihn positiv auf. Dadurch verschmilzt es mit der inneren Membran des intrazellulären Körpers und setzt die Zielnukleinsäure zur Wirkung in die Zelle frei.
Der circRNA-Service von Yaohai Bio-Pharma wird ständig verbessert und kann einen circRNA-LNP-Kapselungsservice bereitstellen, um relevante kritische Prozessparameter zu optimieren und die Konsistenz und Reproduzierbarkeit der circRNA-Arzneimittelproduktion zu verbessern.
Prozess | Service Details | Lieferzeitraum (Tag) | Leistungen |
circRNA-LNP-Kapselung | Material- und Flüssigkeitsvorbehandlung | 2 | circRNA-LNP-Arzneimittelprodukt (DP) |
Mischen von mikrofluidischen Geräten | |||
Tangentialflussfiltration | 1 | ||
Sterilfiltration | |||
circRNA-LNP Qualitätskontrolle | Kapselungseffizienz | 1 | Test Report |
Partikelgröße und Polydispersitätsindex | |||
Zetapotential |
Schnelle Synthese, hohe F&E-Effizienz und voroptimierte Lösungen;
Die Einkapselungsrate kann über 90 % erreichen;
Die Größe der Lipid-Nanopartikel kann durch Veränderung der Flüssigkeitsinjektionsrate und des Flüssigkeitsinjektionsverhältnisses gesteuert werden;
circRNA-LNP-Produkte werden durch Zellexpression in vitro validiert und können das Zielprotein effizient exprimieren.
LNP-eGFP-circRNA-Proben werden vorbereitet und die verschiedenen Dosen davon (1 µg, 2 µg und 4 µg) werden direkt in 293T-Zellen transfiziert, um zu überprüfen, ob sie das Zielprotein exprimieren können. Nach 48 Stunden Transfektion ist ein klares Fluoreszenzsignal zu beobachten und es gibt einen Dosissteigerungseffekt der Fluoreszenzintensität.
Lipo-circ_eGFP, bestehend aus Liposom und nicht eingekapselter eGFP-circRNA, wird als Kontrolle verwendet.