Für die Massenproduktion von mRNA ist die In-vitro-Transkription (IVT) eine effizientere und ausgereiftere Methode. Die IVT-Reaktion verwendet linearisierte Plasmid-DNA, die den T7-Promoter als Vorlage enthält, und mRNA wird mit Nukleosidtriphosphaten (NTPs) als Substrate in Gegenwart von T7-RNA-Polymerase synthetisiert.
Die Nukleotidmodifikation ist ein Durchbruch in der Erforschung von mRNA, bei der unmodifizierte mRNA-Moleküle von intrazellulären RNA-Sensoren erkannt werden, um die angeborene Immunität zu aktivieren. Aus Gründen der mRNA-Immunogenität in vivo und der Translationseffizienz werden im IVT-Prozess normalerweise bestimmte Arten modifizierter NTPs verwendet. Häufige modifizierte Nukleotide sind Pseudouridin (Ψ), N1-Methylpseudouridin (N1Ψ) und 5-Methylcytosin (5mC).
In-vitro-Transkriptionsprozess von mRNA
Reaktionsdiagramm der In-vitro-Transkription (IVT)
Details zu den Dienstleistungen
Optionaler Service | Service Details | Lieferzeit (Werktage) |
In-vitro-Transkription (IVT) | IVT, In-vitro-Transkription | 1 |
| Nukleotidmodifikationen (Ψ/N1Ψ/5mC usw.) |
| Entfernung der DNA-Matrize (DNase I) |
IVT-Zustandsoptimierung - optional | Entwurf und Optimierung von IVT-Reaktionskomponenten | 2-5 |
Unsere Eigenschaften
- Diversifizierte Nukleotidmodifizierungsstrategien
Verbessern Sie die mRNA-Stabilität und Proteinexpression in vivo.
- Rigoroses Testdesign und Optimierung
Es ist eine mRNA-Fragmentpräparation von bis zu 10 kb möglich.
Durch Optimierung der IVT-Reaktionsbedingungen beträgt die Transkriptionsrate bis zu 1:200.
- Strenge Kontrolle der RNase
Eine strenge Kontrolle der RNase durch eine experimentelle Umgebung und Verbrauchsmaterialien kann den mRNA-Abbau wirksam verhindern.
Case Study
Das derzeitige IVT-Reaktionssystem ist grob für synthetische Systeme mit einer Länge von etwa 100 nt optimiert, nicht für mRNAs beliebiger Länge. Je länger die mRNA-Sequenz ist, desto schwieriger ist sie zu transkribieren und desto anfälliger ist sie für Degradation.
Um maßgeschneiderte mRNA-Sequenzen mit einer Länge von etwa 10 kb herzustellen, hat Yaohai Bio-Pharma erfolgreich qualitativ hochwertige Proben mit einem hohen Transkriptionsverhältnis von 1:135 hergestellt und 135 μg zunächst gereinigte mRNA-Produkte erhalten, nachdem 1 μg linearisiertes Plasmid durch rigoroses experimentelles Design, kontinuierliche Optimierung der Reaktionsbedingungen und strenge Kontrolle der RNase in vitro transkribiert wurde.
mRNA-Identifizierung (Agarose-Gelelektrophorese)
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