Yaohai Bio-Pharma stellt circRNA auf der Grundlage des PIE-Systems (Ausrichtung von Exons und Introns) her, das auf der selbstspleißenden Funktion von Typ-I-Introns beruht, um eine RNA-Zyklisierung zu erreichen. Die PIE-Struktur wird unter Verwendung des T4-td-Gens oder des fischartigen tRNA-Vorläufergens entworfen und die Anordnung ist wie folgt:
Das RNA-Intron und das unterstützende Exonfragment sind in zwei Teile unterteilt (5'-terminal und 3'-terminal), wobei die 5'-terminale Sequenz an das Ende der Zielsequenz übertragen wird, die 3'-terminale Sequenz an der Vorderseite der Zielsequenz eingefügt wird und die Zielgensequenz in der Mitte eingefügt wird.
Unter der Katalyse von GTP führt die PIE-Struktur zur Zyklisierung anderer Sequenzen als Introns. In Kombination mit einer sinnvollen Strategie zur Steigerung der Zyklisierungsrate kann Yaohai Bio-Pharma die Zyklisierung von Sequenzen bis zu 4 kb mit einer Zyklisierungsrate von über 80 % erreichen.
Abbildung 1. In-vitro-Zirkulation von circRNA basierend auf dem PIE-System
Details zu den Dienstleistungen
| Prozess | Optionaler Service | Service Details | Lieferzeitraum (Werktag) |
| circRNA-Sequenzdesign und -Optimierung | Design und Optimierung von Codierungssequenzen | CDS-Sequenzausrichtung CDS-Codon-Optimierung | 1 |
| Design und Optimierung nichtkodierender Sequenzen | Design und Optimierung der Intron- und Exonsequenz Homologer Armsequenzentwurf und -optimierung Entwurf und Optimierung der Spacer-Sequenz | 1-2 |
Gängige Strategien für das mRNA-Sequenzdesign
| CircRNA-Komponenten | Biologische Funktionen | Optimierungsstrategien |
| Zweiterminale Intron- und Exonsequenzen | GTP-katalysiertes Intron-Selbstspleißen zur Zyklisierung von Sequenzen außerhalb des Introns. | Entwickelt entsprechend dem T4-td-Gen oder dem Fischöl-tRNA-Vorläufergen. |
| Programmierung | IRES | Interne Ribosomenerkennungsstelle, die die Translation von circRNA reguliert. | Screening von Sequenzen der internen Ribosomeneintrittsstelle (IRES) aus verschiedenen viralen Quellen, z. B. EMCV-, CVB3-Quellen. |
| CDS | Proteinkodierende Regionen, Sequenzen, die für Antigene, Antikörper oder andere funktionelle Proteine kodieren. | Durch Codon-Optimierung wird der Translationsgrad erhöht; bestimmte nicht optimale Codons können bei der Proteinfaltung eine Rolle spielen. |
| Nicht-Codierung | Nicht-kodierende Sequenzen | Zielen Sie auf miRNAs oder Proteine, um eine Gen- oder Proteinregulierung auszuüben. | Durch das Anvisieren spezifischer Bindungsstellen für miRNAs oder Proteine können die Sequenzen der Bindungsstelle wiederholt werden. |
Unsere Eigenschaften
- Optimiertes PIE-Cyclisierungssystem – Kombination mit sinnvollen Optimierungsstrategien, um eine Cyclisierungsrate von über 80 % zu erreichen;
- Hochmodernes CDS-Optimierungsteam. Zusammenarbeit mit einem professionellen KI-Algorithmenteam, um die Optimierung der CDS-Region-Codons abzuschließen;
- Ausgereifte und perfekt verarbeitete circRNA kann mit hoher Zyklisierungseffizienz, hoher Stabilität und hoher Translationseffizienz erreicht werden.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma hat das Kontrollprodukt Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) circRNA auf den Markt gebracht, das auf dem PIE-System zur Erzielung der Zyklisierung von RNA basiert.
Mithilfe eines herkömmlichen Transfektionsreagenz wird eGFP-circRNA in 293T-Zellen transfiziert. Nach 24 Stunden ist ein eGFP-Fluoreszenzsignal (grün) erkennbar, das nach 48 Stunden verstärkt ist. Das Fluoreszenzsignal ist noch am 7. und 14. Tag nach der Transfektion erkennbar.
In-vitro-Expressionsvalidierung von eGFP-circRNA
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