Zellbasierte Wirksamkeitstests
Die Bedeutung des mRNA-Potenztests
Angesichts der rasanten Entwicklung von mRNA-Impfstoffen und -Therapeutika ist eine spezifische Reihe von Analysemethoden erforderlich, um die Wirksamkeit (Bestimmung ihrer biologischen Aktivität) zu testen, einschließlich der Translationseffizienz von mRNA. Diese Methoden basieren typischerweise auf Zelltransfektion und Funktionstests des Zielproteins.
Yaohai Bio-Pharma bietet zellbasierte Wirksamkeitstests für mRNA-Arzneimittelsubstanzen oder LNP-Produkte an, einschließlich Zelltransfektion (293T-, HepG2-, HeLa-, K562-, U937-, Raw264.7-Zellen usw.) und ELISA- oder Western Blotting (WB)-Tests.
Regulatorische Anforderungen für Potenztests
Gemäß den regulatorischen Überlegungen der WHO „sollte die Wirksamkeit jeder Charge des endgültigen Impfstoffs mithilfe einer oder mehrerer geeignet quantitativer und validierter funktioneller Methoden bestimmt werden.“ Mögliche In-vitro-Wirksamkeitstests können zellbasierte Transfektionssysteme oder zellfreie Tests umfassen.“ Und die USP empfahl einen „zellbasierten Assay“, um die Wirksamkeit der mRNA, also die Expression des Zielproteins, zu testen.
Analytische Methode
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Analyse
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Methoden
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Potenz-Assays
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Zellbasierte Transfektion und Zielprotein identifizieren:
293T-, HepG2-, HeLa-, K562-, U937-, Raw264.7-Zellen usw.
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Verfahren
Schritt 1. Zellbasierte Transfektion mit mRNA oder mRNA-LNP
Die Zellen werden kultiviert und mit mRNA oder mRNA-LNP transfiziert. Im Detail wird mRNA nach dem Mischen mit einem Transfektionsreagenz transfiziert, während mRNA-LNP direkt in die Zellen transfiziert wird. Klären Sie nach 24–48 Stunden den Überstand, der das exprimierte Protein enthält, durch Zentrifugation.
Schritt 2. Funktionelle Tests des Zielproteins
Führen Sie ELISA- oder WB-Assays durch, um die funktionelle Bindung der Zielproteine zu beurteilen.
Case Study
Zellbasierte Wirksamkeitsanalysen von mRNA-Proben
Yaohai-BioPharma hat eine zellbasierte Wirksamkeitstestmethode für mRNA entwickelt, die Zellkultur, Zelltransfektion und Proteinfunktionstests umfasst. Wir haben eGFP-mRNA, mCherry-mRNA, Luciferase-mRNA und Spike-Protein-mRNA in 293T-Zellen transfiziert und das Zielprotein durch Fluoreszenz, Lumineszenz- oder Farbsignal, WB und ELISA nachgewiesen.
Zellbasierte Wirksamkeitstests von mRNA-Produkten von Yaohai Bio-Pharma
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