Im Vergleich zur zweistufigen enzymatischen Capping-Methode kann die einstufige Ko-Transkriptionsmethode den Prozess erheblich vereinfachen. Diese methode istergebnisorientiert und beinhaltet die Zugabe von Cap-Analoga zur in vitro Transkription (IVT). Cap-Analoga können zu Beginn der Transkription eingeführt werden, und nach Abschluss der Transkription wird mRNA mit Cap-Struktur erhalten. Aktuelle drittgenerationelle Cap-Analoga können Rückwärts-Capping vermeiden und direkt die Cap 1-Struktur zum Transkriptionsprodukt hinzufügen.
Bei der Berücksichtigung der in vivo Immunogenität von mRNA und der Übersetzungs-effizienz wird im IVT-Prozess oft eine bestimmte Art von modifizierten NTPs verwendet, und gebräuchliche modifizierte Nukleotide sind Pseudouridin (Ψ), N1-Methyl-Pseudouridin (N1Ψ) und 5-Methylcytosin (5mC).
Abbildung: Diagramm der mRNA Ko-Transkription und Capping-Reaktion
Service Details
Service |
Service Details |
Lieferzeit (Arbeitstag) |
Ko-Transkriptionelles Capping |
In vitro Transkriptionsantwort (Clean Cap Analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikationen (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-Vorlagenentfernung (DNase I) |
Optimierung der IVT-Bedingungen - optional |
Design und Optimierung der Reaktionskomponenten |
3-7 |
Unsere Funktionen
- Verschiedenartige Nukleotidmodifikationsstrategien
Mehrere optionale Nukleotidmodifikationsstrategien können die Proteinausdrucksteuerung verbessern.
- Optimiertes Reaktionssystem
Erreichen eines hohen Transkriptionsverhältnisses und einer hohen Kappeffizienz.
Erreichen Sie eine Verschlusssrate von mehr als 95%.
- Strenge Kontrolle von RNasen
Verhindern Sie effektiv die Degradation von mRNA, indem Sie die RNase im experimentellen Umfeld und in den Verbrauchsmaterialien streng kontrollieren.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma hat eine reife Plattform für das co-transkriptionelle Verschlussover entwickelt. Dabei werden saubere Cap-Analoga verwendet, um während der Transkription direkt die Cap1-Struktur hinzuzufügen, wobei ein reverses Verschlusen vermieden wird. Nach standardisierter Probenvorbehandlung und Kapillarelektrophorese (CE)-Detektion erreicht die Verschlusssrate des verstärkten grünen fluoreszierenden Proteins (eGFP) mRNA mehr als 95%.
verschlusseffizienz der eGFP mRNA von mehr als 95%
Die durch co-transkriptionelles Verschlusen vorbereiteten eGFP mRNA und mCherry mRNA werden jeweils in 293T-Zellen transfektiert, und nach 48 Stunden wird ein starker fluoreszierender Signal beobachtet, was darauf hinweist, dass die mRNA effizient in den 293T-Zellen exprimiert wird.
Expression von eGFP mRNA und mCherry mRNA in 293T-Zellen
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