Im Vergleich zum zweistufigen enzymatischen Capping kann die einstufige co-transkriptionelle Capping-Methode den Prozessablauf erheblich verkürzen. Die Methode ist ergebnisorientiert und beinhaltet die Zugabe von Cap-Analoga zur In-vitro-Transkriptionsreaktion (IVT). Cap-Analoga können zu Beginn der Transkription eingeführt werden, und nach Abschluss der Transkription kann mRNA mit Cap-Struktur gewonnen werden. Aktuelle Cap-Analoga der dritten Generation können das umgekehrte Capping vermeiden und dem Transkriptionsprodukt direkt die Cap-1-Struktur hinzufügen.
Aus Gründen der mRNA-Immunogenität in vivo und der Translationseffizienz werden im IVT-Prozess häufig bestimmte Arten modifizierter NTPs verwendet. Häufig verwendete modifizierte Nukleotide sind Pseudouridin (Ψ), N1-Methylpseudouri-din (N1Ψ) und 5-Methylcytosin (5mC).
Abbildung: Diagramm der mRNA-Co-Transkription und Capping-Reaktion
Service Details
Service | Service Details | Lieferzeit (Werktage) |
Co-transkriptionelles Capping | Transkriptionelle Reaktion in vitro (Clean Cap-Analogon) | 1 - 2 |
| Nukleotidmodifikationen (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Entfernung der DNA-Matrize (DNase I) |
IVT-Zustandsoptimierung - optional | Entwurf und Optimierung von Reaktionskomponenten | 3 - 7 |
Unsere Eigenschaften
- Diversifizierte Nukleotidmodifizierungsstrategien
Mehrere optionale Strategien zur Nukleotidmodifizierung können die Proteinexpression verbessern.
- Optimiertes Reaktionssystem
Erreichen Sie eine hohe Transkriptionsrate und eine hohe Capping-Effizienz.
- Stabiler Verschließprozess
Erreichen Sie eine Kappungsrate von über 95 %.
- Strenge Kontrolle der RNase
Verhindern Sie wirksam den mRNA-Abbau durch eine strenge Kontrolle der RNase in der Versuchsumgebung und den Verbrauchsmaterialien.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma hat eine ausgereifte Plattform für den co-transkriptionellen Capping-Prozess entwickelt, bei der saubere Cap-Analoga verwendet werden, um die Cap1-Struktur direkt hinzuzufügen und dabei umgekehrtes Capping zu vermeiden. Nach standardisierter Probenvorbehandlung und Kapillarelektrophorese (CE)-Erkennung kann die Capping-Rate der mRNA des verstärkten grünen fluoreszierenden Proteins (eGFP) mehr als 95 % erreichen.
eGFP mRNA-Capping-Effizienz von über 95 %
Die durch ko-transkriptionelles Capping hergestellte eGFP-mRNA und mCherry-mRNA werden jeweils in 293T-Zellen transfiziert und nach 48 Stunden wird ein starkes Fluoreszenzsignal beobachtet, was darauf hindeutet, dass die mRNA in 293T-Zellen effizient exprimiert wird.
Expression von eGFP-mRNA und mCherry-mRNA in 293T-Zellen
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