Zellbasierte Wirksamkeitstests
Die Bedeutung des mRNA-Wirksamkeitstests
Mit der raschen Entwicklung von mRNA-Impfstoffen und -Therapien werden spezifische Analysemethoden benötigt, um die Wirksamkeit (definiert durch ihre biologische Aktivität) zu testen, wobei die Übersetzungs-effizienz von mRNA einbezogen wird. Diese Methoden basieren in der Regel auf Zelltransfektion und funktionellen Assays des Zielproteins.
Yaohai Bio-Pharma bietet zellbasierte Wirksamkeitsassays für mRNA-Wirkstoffe oder LNP-Produkte an, einschließlich Zelltransfektion (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 Zellen usw.) und ELISA- oder Western Blotting (WB)-Assays.
Regulatorische Anforderungen für Wirksamkeitsassays
Gemäß den WHO-Regelvorgaben: „Die Wirksamkeit jedes Lots des endgültigen Impfstoffes sollte mit einem geeigneten, quantitativen und validierten funktionalen Verfahren bestimmt werden. Potenzielle in-vitro-Wirksamkeitstests können zellbasierte Transfektionssysteme oder zellenfreie Tests umfassen.“ Außerdem empfiehlt die USP einen „zellbasierten Test“, um die Wirksamkeit von mRNA zu überprüfen, d.h. die Expression des Zielproteins.
Analytische Methode
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Analyse
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Methoden
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Wirksamkeitsassays
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Zellbasierte Transfektion und Identifizierung des Zielproteins:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 Zellen, etc.
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Verfahren
Schritt 1. Zellbasierte Transfektion mit mRNA oder mRNA-LNP
Die Zellen werden gezüchtet und mit mRNA oder mRNA-LNP transfektiert. Im Detail wird mRNA nach dem Mischen mit einem Transfektionsreagenz transfektiert, während mRNA-LNP direkt in die Zellen transfektiert wird. Nach 24-48 Stunden wird der Supernatant, der das exprimierte Protein enthält, durch Zentrifugation klargestellt.
Schritt 2. Funktionsassays des Zielproteins
Führen Sie ELISA- oder WB-Assays durch, um die funktionelle Bindung der Zielproteine zu bewerten.
Fallstudie
Zellbasierte Wirksamkeitsassays von mRNA-Proben
Yaohai-BioPharma hat eine zellbasierte Wirksamkeitsassay-Methode für mRNA entwickelt, die Zellkultur, Zelltransfektion und Proteinfunktionsassays umfasst. Wir haben eGFP-mRNA, mCherry-mRNA, Luciferase-mRNA und Spike-Protein-mRNA in 293T-Zellen transfektiert und das Zielprotein über fluoreszenzbedingte, lumineszierende oder färbende Signale sowie WB und ELISA erkannt.
Zellbasierte Wirksamkeitsassays von mRNA-Produkten durch Yaohai Bio-Pharma
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