Рекомбинантни ензим за терапеутску употребу
Терапеутски ензими добијени биотехнолошким процесима се широко користе за неколико клиничких примена, укључујући терапију замене ензима, разградњу акумулираних метаболита и токсина, лечење рака и уређивање генома. Неколико терапеутских ензима може се произвести у систему микробне експресије.
| апликација |
Ензим |
Супстанца |
Типични производи/цевоводи |
| Терапија замене ензима |
Аденозин деаминаза, АДА |
Аденозин или деоксиаденозин |
Елапегадемасе-лвлр (Ревцови) |
| Фенилаланин амонијак лиаза, ПАЛ |
Фенилаланин |
Пегвалиасе-пкпз (Палинзик) |
| Деградација акумулираних метаболита |
Уриказа/урат оксидаза |
Мокраћне киселине |
Пеглтицасе (Кристекка)Расбурицасе (Фастуртец) |
| Колагеназа |
"Ожиљак" од колагена |
Цоллагенасе цлостридиум хистолитицум (Ксиафлек, Кво, Сантил) |
| Скраћени људски плазмин |
Колаген, фибронектин и ламинин |
окриблазмин (Јетреа) |
| Активатор плазминогена скраћеног ткива (тПА) |
Пласминоген |
Ретепласе (Ретавасе) |
| ИгГ протеазе |
Имуноглобулин Г (ИгГ) |
имлифидаза (идефрикс) |
| ИгА протеасе |
Имуноглобулин А (ИгА) |
ПКУ308/АП308ИГАН ИгА протеаза |
| Деградација токсина |
Карбоксипептидаза Г2 |
Метотрексат |
Глукарпидаза (Вораксаза) |
| Лечење рака |
Ензим специфичан за аспарагин |
аспарагин |
Аспарагиназа (Елспар) Цаласпаргасе пегол-мкнл (Аспарлас) |
| Уређивање генома |
Цас9 нуклеаза |
Циљни ген |
Екагамглогене аутотемцел (Ека-цел, ЦТКС001) |
Рекомбинантни ензим као материјал
Постоји неколико ензима који се користе у продукцији РНК дугог кодирања (нпр. мРНА, саРНА, цирцРНА), производњи коњугата антитело-лек (АДЦ) и других. Ензими произведени микробима су исплативији од ћелија сисара, посебно система експресије Е. цоли.
| апликација |
Ензим |
функција |
| Ензими за линеарну производњу РНК, без РНАзе |
Рестрикцијске ендонуклеазе |
Линеаризација плазмидне ДНК (пДНК) да би се избегло стварање дужег транскрипта. |
| Т7 РНК полимераза (Т7 РНАП) |
Везати се за Т7 промотер и генерисати специфичан РНК транскрипт; Игра кључну улогу током реакције ин витро транскрипта (ИВТ). |
| Ензим за затварање вакцине |
Додајте Цап структуре на 5′ крајеве ИВТ мРНА. |
| Пирофосфатаза, неорганска (иППасе) |
Спречите пирофосфат током ИВТ реакције. |
| Инхибитор РНазе, рекомбинантни |
Инхибирају активност РНКазе током ИВТ реакције. |
| Дназа И |
Уклоните ДНК шаблон. |
| Ензим за производњу циркРНК, без РНКазе |
РНасе Р |
Сварити линеарну РНК и обогатити кружну РНК. |
| Коњугација гликана посредована ензима |
Пептид-Н-гликозидаза (ПНГаза Ф) |
Цепа амидну везу између првог сахарида ГлцНАц и Асн297 бочног ланца Л; Ослобађање гликана из ИгГ антитела. |
| Бактеријска трансглутаминаза (БТГ) |
Коњугујте корисна оптерећења специфично за локацију да бисте генерисали АДЦ. |
| Сортасе А |
Катализују лигацију протеина. |
| β1,4-галактозидаза |
Ослободите све терминалне галактозе и формирајте хомогену Г0 изоформу антитела. |
| β1,4-галактозилтрансфераза (Гал-Т) |
Пренесите остатак шећера са хемијски реактивном функционалном групом. |
| α2,6-сијалилтрансфераза (Сиал Т) |
Уградите терминалне остатке сијаличне киселине у нативну гликанску структуру антитела. |
| Ензимски посредовано ремоделирање гликана и гликоинжењеринг |
Ендо-Н-ацетилглукозаминидаза (ЕНГасе) |
Хидролизуј β1,4-гликозидну везу између ГлцНАцβ1–4ГлцНАц Н-гликана; Уклоните Н-везане гликане на Фц региону ИгГ антитела. |
| Ендогликозидаза С (ЕндоС) |
|
| гликозилтрансферазе (ГТ) |
Пренесите Н-гликан оксазолин у дефукозиловане ИгГ. |
| други |
Ензими произведени микробним сојем |
Прилагођена потреба |
Рекомбинантни ензим као реагенс
Протеазе за уклањање ознака
Фузионе ознаке се често користе за побољшање растворљивости и стабилности рекомбинантних протеина од интереса и олакшавају њихово пречишћавање. Најчешће коришћене ознаке укључују Хис-ознаку, протеин који везује малтозу (МБП), глутатион-с-трансферазу (ГСТ) итд.
Типично, секвенца линкера се додаје између фузионе ознаке и секвенце циљног протеина да би се уклонила ознака. Уклањање фузионих ознака захтева протеазе специфичне за локацију, као што су ентерокиназа (ЕК), тромбин, протеаза вируса јеткања дувана (ТЕВп), протеаза хуманог риновируса 3Ц (ХРВ3Ц), протеаза малог убиквитин модификационог протеина (СУМО), вирус мрља на венама дувана ( ТВМВ) протеаза и карбоксипептидаза А/Б (ЦПА/ЦПБ).
| тип |
Ензим |
Рецогнитион Сите |
| Ендопротеазе за уклањање ознака |
Ентерокиназа (ЕК), ентеропептидаза |
ДДДДК↓ |
| тромбин |
ЛВПР↓ГС |
| ТЕВ протеасе |
ЕНЛИФК↓Г |
| ХРВ3Ц протеасе |
ЛЕВЛФК↓ГП |
| СУМО протеасе |
СУМО терцијарна структура |
| ТВМВ протеасе |
ЕТВРФКГ↓С |
| Егзопротеазе за уклањање ознака |
карбоксипептидаза А (ЦПА) |
Ц-терминалне аминокиселине, осим Про, Лис и Арг |
| карбоксипептидаза Б (ЦПБ) |
Ц-терминални Лис и Арг |
Друге протеазе, нуклеазе и амидазе
| апликација |
Ензим |
функција |
| Друге протеазе |
Протеаза К |
Серинска протеаза која вари протеине хидролизом пептидних веза. |
| ИдеС, ИгГ протеаза |
Ензими који разграђују ИгГ (Идес) који се цепају на одређеном месту имуноглобулина Г (ИгГ), стварајући Фаб и Фц фрагменте |
| ИгА1 протеасе |
Протеолитички ензим који цепа специфично место у секвенци зглобног региона хуманог имуноглобулина А1 (ИгА1). |
| Нуклеаза |
Нуклеаза |
Цепа нуклеинске киселине (ДНК или РНК) хидролизом фосфодиестарских веза. |
| Ограничите ензим |
Ендонуклеаза која цепа ДНК на или близу одређених места. |
| Амидасе |
ПНГасе Ф |
Цепа између најдубљег Н-ацетилглукозамина (ГлцНАц) и остатака аспарагина са високим садржајем манозе, хибрида и комплексних олигосахарида. |
Иаохаи Био-Пхарма нуди ЦДМО решење за рекомбинантне ензиме на једном месту
- Инжењеринг и скрининг микробних сојева
- Банкарство микробних ћелија (ПЦБ/МЦБ/ВЦБ)
- Упстреам Процесс Девелопмент
- Развој низводних процеса
- Развој формулације
- ГМП Мануфацтуринг
- Испуните и завршите
- Аналитичко и тестирање
- Регулаторне послове
Референца:
[1] Хенниган ЈН, Линцх МД. Прошлост, садашњост и будућност терапија заснованих на ензима. Друг Дисцов Тодаи. 2022 Јан;27(1):117-133. дои: 10.1016/ј.друдис.2021.09.004.
EN
