Кружна мРНА (цирцРНА) се широко користи у проучавању функција гена или протеина. У међувремену, популаран је у развоју профилактичких и терапеутских биолошких лекова, сличних мРНК.
Иаохаи Био-Пхарма је успоставила низ технологија за синтезу цирцРНА да би обезбедила висококвалитетну РНК, као што су дизајн секвенце и оптимизација, ин витро транскрипција (ИВТ), циркуларизација/циклизација, пречишћавање и инкапсулација липидних наночестица (ЛНП). Сви производи се производе под строгим стандардима контроле квалитета (КЦ).
У поређењу са линеарном мРНК, кружна РНК (цирцРНА) је стабилнија по структури и главна је врућа тачка у тренутним истраживањима лекова нуклеинских киселина. Има широк спектар примена у различитим областима, било као кодирајућа цирцРНА или некодирајућа цирцРНА, укључујући профилактичке вакцине за заразне болести, терапијске онколошке вакцине, терапеутске онколошке лекове, терапију замене протеина, регенеративну медицину, ћелијску и генску терапију (ЦГТ) , улога молекуларног сунђера и РНК аптамера.
Proces | Опциона услуга | Детаљи услуге | Период испоруке (дан) |
Дизајн и оптимизација цирцРНА секвенце | Дизајн и оптимизација кодних секвенци | Оптимизација ЦДС кодона | 1 |
Дизајн и оптимизација некодирајућих секвенци | Секвенца интрона и егзона, дизајн и оптимизација хомологног крака и одстојника | 1-2 | |
Кружна припрема плазмида | Гене Синтхесис | Синтеза гена (треће стране) | 7-10 |
Пласмид Амплифицатион | Пласмид Амплифицатион | 2 | |
Екстракција плазмида | |||
Линеаризована припрема плазмида | Линеаризација и пречишћавање плазмида | Линеаризација плазмида | 1 |
Линеаризација ДНК Пурифицатион | |||
Ин витро транскрипција и циклизација | Ин витро транскрипција и циклизација | Ин витро транскрипција и реакције циклизације | 1-2 |
РНасе Р Дигестион | |||
Оптимизација-опционо | Композиција реакције, оптимизација времена | 2-5 | |
цирцРНА Пурифицатион | Конвенционални метод пречишћавања | Падавине литијум хлорида | 1 |
Пречишћавање магнетних перли | 1 | ||
Високо чиста цирцРНА Пурифицатион | Препаративна течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ) | 1-2 | |
Буффер Екцханге | Ултрафилтрација | 1 | |
цирцРНА лиофилизација | Узорак пуњења | Попуњавање | 2-3 |
Лиофилизација | Пре-фризинг | ||
Примарно сушење (сублимација) | |||
Секундарно сушење (десорпција) | |||
цирцРНА-ЛНП инкапсулација | ЛНП Енцапсулатион | Предтретман материјала и течности | 2 |
Микрофлуидно мешање уређаја | |||
Буффер Екцханге | Филтрација тангенцијалног протока | 1 | |
стерилисан | Филтрација | ||
Контрола квалитета плазмидне ДНК | Концентрација/чистоћа | Ултраљубичаста (УВ) спектрофотометрија | 1-2 |
Конформација плазмида | Агарозна гел електрофореза (АГЕ) | ||
Капиларна електрофореза (ЦЕ) – опционо | |||
Идентификација плазмида | Идентификација рестрикционог ензима/АГЕ | ||
Контрола квалитета цирцРНА | Концентрација/чистоћа | Ултраљубичаста (УВ) спектрофотометрија | - |
Чистоћа | Агарозна гел електрофореза (АГЕ)/Е-гел | 0.5 | |
ХПЛЦ-опционо | 1 | ||
Контрола квалитета цирцРНА-ЛНП | Ефикасност енкапсулације | РибоГреен Метход | 1 |
Величине честица | Динамичко расипање светлости (ДЛС) | 1 | |
Индекс полидисперзности | Динамичко расипање светлости (ДЛС) | 1 | |
Зета Потенцијал | Динамичко расипање светлости (ДЛС) | 1 | |
Тест потенције заснован на ћелијама | Целл Трансфецтион | Полагање ћелија, трансфекција ћелија | 4 |
Детекција циљног протеина | Посматрање флуоресценције, Вестерн Блот/ЕЛИСА | 1-3 |
Трансфектовали смо побољшани зелени флуоресцентни протеин цирцРНА (еГФП цирцРНА), мЦхерри цирцРНА, луциферазу цирцРНА у 293Т ћелије и детектовали циљни протеин путем флуоресценције, луминесцентног или колор сигнала, вестерн блот (ВБ), ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА).
Тестови потенције цирцРНА узорака на бази ћелија компаније Иаохаи Био-Пхарма