mRNA je široko korišćena u istraživanju funkcija gena ili proteina. Istovremeno, često se koristi u razvoju preventivnih i terapeutskih bioloških sredstava. Kao obična strategija sinteze RNA molekula, transkripcija in vitro (IVT) nam omogućava da dobijemo prilagođene transkripte efikasno.
Yaohai Bio-Pharma je osnovala seriju tehnologija za sintezu mRNA kako bi pružila visokokvalitetne RNA, kao što su dizajn i optimizacija niza, IVT, čišćenje, liofilizacija i encapsulacija lipidnim nanocesticama (LNP). Sva proizvodstva se izdaju prema strognim standardima kontrole kvaliteta (QC).
Sa izbijanjem pandemije COVID-19 2020. godine, mRNA tehnologija je napredovala u velikom skoku, a njeni povezani istraživanja i primene su dobili neverovatno razvoj, uključujući preventivne vakcine za sprečavanje zaraznih bolesti, terapeutske vakcine i lekove za onkologiju, terapiju tumora, terapiju zamenom proteina, regenerativnu medicinu i celijaski i genetski transfer (CGT).
mRNA cevci | mRNA Terapeutika |
|
Процес | Opcionalna Usluga | Detalji usluge | Rok isporuke (radni dan) | Isporučivo |
dizajn i optimizacija mRNA sekvence | Dizajn i optimizacija kodirajućih sekvenci | Dizajn CDS sekvence i optimizacija kodona | 1-3 | Datoteka sekvence |
Dizajn i optimizacija ne-kodirajućih nizova | Dizajn i optimizacija UTR, poliA nizova | |||
Priprema plazmida šablon transkripcije | Priprema rekombinantnog plazmida | Sinteza gene | 7-10 | |
Amplifikacija i ekstrakcija plazmida | 4 | |||
Linearizacija i očišćavanje plazmida | ||||
transkripcija mRNA in vitro | Kovezno zaklapanje (jednoetapna metoda) | Transkripcija in vitro (IVT) / Analog kap | 1-2 | N/A |
Modifikacije nukleotida (modifikacije UTP/CTP) | ||||
Uklanjanje DNS šablon (DNase I) | ||||
Enzimatsko zakupljanje (dvofazni proces) | IVT | 2-3 | ||
Modifikacije nukleotida (modifikacije UTP/CTP) | ||||
Uklanjanje DNS šablon (DNase I) | ||||
čišćenje mRNA (litijum hlorka/magnetne čestice) | ||||
Enzimatsko zakupljanje | ||||
čišćenje mRNA | Konvencionalna shema čišćenja | Osrednjavanje litijumom hlorkom | 1 | lijekovita tvar mRNA |
Čišćenje magnetnim česticama | ||||
Shema čišćenja kolonom hromatografije | Kombinacija više metoda hromatografije | 1-2 | ||
Zamena bufera | Ултрафилтрација | 1 | ||
liofilizacija mRNA | Liofilizacija | Prethodno zamerzavanje | 2-3 | mRNA liofilizovani prah |
Prva faza sušenja (sublimacija) | ||||
Druga faza sušenja (dezorpcija) | ||||
mRNA inkapsulacija | LNP Enkapsulacija | LNP Enkapsulacija | 2-3 | mRNA-LNP lekarski proizvod |
Koncentracija i zamena bufera | ||||
analiza kvaliteta mRNA | mRNA lek substance / liofilizovani prah | Koncentracija, čistoća | 1 | Извештај о тестирању |
Integritet, efikasnost zakupljanja, raspodela poliA repa | 2-5 | |||
mRNA-LNP lekoviti proizvod | Efikasnost enkapsulacije | 1 | ||
Veličina i raspodela čestica | ||||
Površinska napetost | ||||
validacija izražavanja mRNA | ocena 293T stanica | Prikupljanje celija | 4 | |
Privremena transfekcija celija | ||||
Nabлюдение флуоресцентног сигнала | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Ензим-повезани имунологија асaј (ELISA) |
5' Kap |
▪ Nekapirano ▪ Cap0, ko-kapirano ▪ Cap1, ko-kapirano ▪ Cap1, ензимско капирање |
5’ UTR/3’ UTR |
▪ Prirodnim UTR nizom ▪ Mutantnim/Inženjerskim UTR nizom |
3' PoliA rep |
▪ 100A ~120A rep (preporučeno) ▪ Segmentirani poliA rep ▪ Ostali prilagođeni repovi |
Izmijenjeni nukleotidi |
▪ Nepromijenjeni bazovi ▪ Pseudaureidin (Ψ) ▪ N1-Metilsudopseidon (N1Ψ) ▪ 5-metilcitozin (m5C) ▪ 5-metiluridin (m5U) ▪ 5-metoksiuridin (5moU) ▪ 2-tioridin (s2U) ▪ 2′-O-metil-U ▪ Oste modifikacije |
Integrirani tok usluga
Pruža niz usluga od dizajna sekvenci na početku do pripreme mRNA, kontrole kvaliteta i validacije izražavanja na kraju.
Međunarodno vodeći dizajn i optimizacija sekvenci
Profesionijski dizajn i optimizacija mRNA sekvenci omogućavaju efikasno izražavanje mRNA.
Raznovrsne Nukleotidske Modifikacije
Učinkovito povećavaju izražavanje mRNA i smanjuju nespoštivane imunološke reakcije na mRNA.
Dovršena Platforma za Čišćenje
Kombinovanjem konvencionalnog i samodizajniranog metoda čišćenja, dobijaju se uzorci mRNA sa visokom čistošću.
Kompletna Platforma za Kvalitetnu Kontrolu
Oglašuju se opcije kvalitetne kontrole kako bi se ispunile zahtevevanja rutinskih testova, kao što su koncentracija, A260/280 čistoća i integritet, kao i zahtevi za visoku kontrolu kvaliteta, kao što su učinkovitost zaklapanja/polumjer raspodele polia.
Фаст Деливери
Prilagođena mRNA može biti dostavljena u roku od 7 dana, osim u slučajevima vanredne sinteze sekvenci.