U vezi masovne proizvodnje mRNA, transkripcija in vitro (IVT) je efikasnija i zrelijа metoda. Reakcija IVT koristi linearizovani plazmidni DNA koji sadrži T7 promotor kao šablon, a mRNA se sintetizira uz pomoć nukleotidnih trifosfata (NTP) kao substraata u prisustvu T7 RNA polimeraze.
Modifikacija nukleotida predstavlja prekid u istraživanju mRNA, gde su neizmenjeni mRNA molekuli prepoznati od strane intracelularnih senzora RNA da bi se aktivirala prirodna imunologija. U obziru na imunogenost mRNA u živome organizmu i efikasnost prevoda, proces IVT obično koristi određene vrste izmenjenih NTP-a, a česte izmenjene nukleotide su pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC).
Proces in vitro transkripcije mRNA
Dijagram reakcije in vitro transkripcije
Detalji usluga
Opcionalna Usluga |
Detalji usluge |
Rok isporuke (radni dan) |
Transkripcija in vitro (IVT) |
IVT, In vitro transkripcija |
1 |
| Modifikacije nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC, itd.) |
| Uklanjanje DNS šablon (DNase I) |
Optimizacija stanja IVT - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti IVT reakcije |
2-5 |
Naše karakteristike
- Raznovrsne strategije modifikacije nukleotida
Poboljšavaju stabilnost mRNA i izraz proteina in vivo.
- Strog Design i Optimizacija Testa
priprema fragmenata mRNA do 10kb je moguća.
Optimizacijom uslova reakcije IVT, brzina transkripcije može biti do 1:200.
Strog kontrola RNase kroz eksperimentalni okruženje i potrošnja efektivno sprečava degradaciju mRNA.
Studija slučaja
Trenutni sistem IVT reakcije je približno optimizovan za sintetičke sisteme dužine oko 100 nt, ne za mRNA proizvoljne dužine. Čim je mRNA niz duži, teže je za transkripciju i skloniji degradaciji.
Da bi se pripremili prilagođeni mRNA nizovi dužine oko 10 kb, Yaohai Bio-Pharma je uspešno pripremila visokokvalitativne uzorke sa omjerom transkripcije od 1:135 i dobila 135 μg početno očišćenih mRNA proizvoda nakon što je 1 μg linearizovanog plazmita bio transkribiran in vitro kroz strogo eksperimentalno oblikovanje, neprestano unapređivanje uvjeta reakcije i strogo kontrolu RNase.
identifikacija mRNA (Elektroforeza na agarosnom gełu)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
