Што се тиче масовне производње мРНК, ин витро транскрипција (ИВТ) је ефикаснија и зрелија метода. ИВТ реакција усваја линеаризовану плазмидну ДНК која садржи Т7 промотер као шаблон, а мРНА се синтетише са нуклеозид трифосфатима (НТП) као супстратима у присуству Т7 РНК полимеразе.
Модификација нуклеотида је напредак у истраживању мРНК, где се интрацелуларни РНК сензори препознају немодификовани молекули иРНК ради активирања урођеног имунитета. За разматрање имуногености мРНК ин виво и ефикасности транслације, ИВТ процес обично користи одређене врсте модификованих НТП-ова, а уобичајени модификовани нуклеотиди су псеудоуридин (Ψ), Н1-метил-псеудоуридин (Н1Ψ) и 5-метилцитозин (5мЦ).
Ин витро процес транскрипције мРНА
Дијаграм реакције ин витро транскрипције (ИВТ).
Детаљи о услугама
Опциона услуга | Детаљи услуге | Период испоруке (радним даном) |
Ин витро транскрипција (ИВТ) | ИВТ, ин витро транскрипција | 1 |
| Модификације нуклеотида (Ψ/Н1Ψ/5мЦ, итд.) |
| Уклањање ДНК шаблона (ДНаза И) |
Оптимизација ИВТ услова - опционо | Дизајн и оптимизација компоненти ИВТ реакције | 2-5 |
Наше карактеристике
- Стратегије модификације разноврсних нуклеотида
Побољшати стабилност мРНА и експресију протеина ин виво.
- Ригорозни дизајн и оптимизација тестова
Може се постићи припрема фрагмента мРНА до 10 кб.
Оптимизацијом ИВТ реакционих услова, брзина транскрипције је до 1:200.
Строга контрола РНазе кроз експериментално окружење и потрошни материјал може ефикасно спречити деградацију мРНК.
Истраживање случаја
Тренутни ИВТ реакциони систем је грубо оптимизован за синтетичке системе дужине од око 100 нт, а не за мРНК произвољне дужине. Што је мРНА секвенца дужа, то је теже транскрибовати и склонија је деградацији.
Да би припремила прилагођене секвенце мРНА дужине око 10 кб, Иаохаи Био-Пхарма је успешно припремила висококвалитетне узорке са високим односом транскрипције од 1:135 и добила 135 μг иницијално пречишћених мРНА производа након 1 μг линеаризованог плазмида. је транскрибован ин витро кроз ригорозни експериментални дизајн, континуирану оптимизацију реакционих услова и строгу контролу РНазе.
Идентификација мРНА (електрофореза агарозног гела)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
