Значај развоја довнстреам процеса (ДСП).
Цела ферментациона бујон садржи циљни протеин или плазмид, као и нечистоће везане за производ и процес, нпр. агрегате, супстрате микробних ћелија, протеине ћелије домаћина (ХЦП), ДНК ћелије домаћина (ХЦД), ендотоксин и антибиотике.
Због тога је од кључног значаја да се дизајнира ефикасан ДСП, процес пречишћавања, да се уклоне одређене нечистоће и произведе високо пречишћена и висококвалитетна лековита супстанца. Поред тога, оптимизација процеса пречишћавања може помоћи да се повећа опоравак производа, смање трошкови и побољша скалабилност и поновљивост процеса.
Кључне речи: развој процеса, оптимизација и валидација, процес пречишћавања, хроматографија, елиминација нечистоћа, уклањање ХЦП, елиминација ХЦД, уклањање ендотоксина, денатурација и рефолдинг протеина, ВЛП монтажа, коњугација
Примена: Биофармацеутска индустрија, хумана медицина, медицина за животиње, вакцина, рекомбинантни биолошки лекови великих молекула, рекомбинантни биолошки лекови, биолошки реагенс
ДСП решења Иаохаи Био-Пхарма
Имамо велико искуство у изоловању циљних протеина или плазмида из сложених матрица развојем и оптимизацијом процеса пречишћавања у наставку. Постоје различите врсте јединичних операција погодних за пречишћавање биолошких препарата, укључујући центрифугирање, филтрацију, хомогенизацију, алкалну лизу, ултрафилтрацију, преципитацију, денатурацију и поновно савијање протеина, хроматографију итд.
Наше доступне услуге развоја пречишћавања укључују:
- Развој целокупног процеса пречишћавања од сакупљања ћелија или супернатанта до коначног активног састојка.
- Оптимизација процеса пречишћавања на основу нечистоћа у вези са производом и процесом ради повећања квалитета и безбедности производа, нпр. ХЦП, ХЦД, ендотоксин.
- Дефинисање и оптимизација кључних параметара у једној или више јединичних операција, укључујући лизу ћелија, филтрацију тангенцијалног тока, скрининг смоле, хроматографију, денатурацију протеина и поновно савијање, итд.
- Оптимизација процеса у смислу квалитета, приноса, поврата, трошкова и скалабилности.
- Валидација низводног процеса пречишћавања.
- Процена опсега параметара заснована на ризику и Дизајн експеримената (ДоЕ) у моделирању процеса.
Детаљи услуге
Стандардизоване платформе за пречишћавање протеина или плазмида су засноване на вишеструким сировим корацима пречишћавања и мање од 4 корака хроматографије, укључујући хватање, међупречишћавање и полирање.
| Детаљи услуге |
Операције јединица |
parametri |
| Сирово пречишћавање |
Центрифугација |
Брзина ротације, време |
| Хомогенизација под високим притиском |
Укупан садржај чврсте материје, притисак, циклуси |
| Континуирана алкална лиза |
Однос ресуспендованих ћелија према раствору за лизу, време лизе |
| Филтрација тангенцијалног протока |
Материјал мембране и величина пора, брзина протока, трансмембрански притисак (ТМП), однос запремине филтера и површине мембране |
| Падавине |
Тип и концентрација преципитанта, адитив, пХ, температура, време |
| Денатурација и поновно савијање |
Солубилизација протеина инклузијског тела |
Концентрација денатуранта (нпр. уреа, гванидин ХЦл, јак јонски детерџент), детерџенти (нпр. натријум додецил сулфат, СДС), редукциони агенси (нпр. дитиотреитол, ДТТ), хелатни агенси (етилендиаминтетрасирћетна киселина, ЕДТА), температура, |
| Рефолдинг протеина |
Методе поновног савијања (разблаживање, дијализа или СЕЦ поновно савијање), концентрације протеина, пуфери, пХ, температура, време, оксидациони и редукциони агенси (нпр. глутатион, ГСХ/оксидовани глутатион, ГССХ, ДТТ/ГССХ, цистеин/цистин), адитиви малих молекула (Л-аргинин, уреа, гванидин/ХЦл и детерџенти) |
| Хватање, средње пречишћавање и полирање |
АЦ (афинитетна хроматографија) |
Неколико типова хроматографске смоле/колоне (нпр. АЦ, ИЕКС, ХИЦ, СЕЦ, РПЦ, ММЦ), дужина и пречник колоне, састав пуфера, запремина убризгавања, састав мобилне фазе (адсорпција и десорпција), пХ, брзина протока, везивање, Услови прања и елуирања. |
| ИЕКС (Ајонска или катјоноизмењивачка хроматографија) |
| ХИЦ (Хидрофобна интеракциона хроматографија) |
| Одсољавање и/или хроматографија искључења величине (СЕЦ) |
| РПЦ (хроматографија обрнуте фазе) |
| ММЦ, Микед моде хроматограпхи |
Студија случаја
Случај КСНУМКС
Ми смо задужени да развијемо и оптимизујемо низводни процес пречишћавања како бисмо повећали чистоћу протеина са 85% на 90% уз смањење корака хроматографије.
Иаохаи је испоручио робустан и скалабилан процес пречишћавања са 3 корака хроматографије за циљни протеин, бактеријску алергију. А коначна чистоћа је достигла 95%.
Случај КСНУМКС
Иаохаи је именован од стране нашег клијента да оптимизује процес уклањања ендотоксина вакцине са вирусом сличним честицама (ВЛП).
Наш тим је извршио оптимизацију параметара хроматографије и припремио лековиту супстанцу чистоће од 98% и остатка ендотоксина од 12.8ЕУ/мг.
Наша искуства
- Учествовали смо у развоју и производњи различитих великих молекула, укључујући рекомбинантне подјединичне вакцине, ВЛП, хормоне (инсулин, ГЛП-1, хормон раста), цитокине (интерлеукин-2/ИЛ-2, ИЛ-15, ИЛ-21 ), фактори раста (ЕГФ, ФГФ, НГФ), нанотела/антитела са једним доменом (сдАбс), ензими итд.
Опрема
Користимо водеће у индустрији АКТА Пуре, АКТА Авант и Препаративе ХПЛЦ системе за извођење различитих метода хроматографије укључујући афинитет, јонску измену, хидрофобну интеракцију, реверзну фазу и хроматографију искључења величине.
SR
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
