Zauzetost N-glikozilacijskog sajta je fiziološka karakteristika glikoproteina i glavno proizvodi N-glikan. Usluga za analizu zauzetosti N-glikozilacijskog sajta od strane Yaohai Bio-Pharma se izvodi preko šećirenja, elipsa, obogaćivanja i analize pomoću tehnike Likvidna hromatografija-Elektrospraj ionizacija Masenska spektroskopija/Masenska spektroskopija (LC-ESI-MS/MS).
Bili smo angažovani u karakterizaciji strukture proteina različitih velikih molekula, uključujući Rekombinantne Podjedinične Cepice, Nanotijele/VHHs/ Jednodomene Antitijela (sdAbs), Odlomke Antitijela, Hormone/Peptidi, Cytokine, Rastne Faktore (GF), Enzime, Kolagene itd.
Regulativni zahtevi za zauzetost N-glikozilacijskog sajta
Prema smernici ICH Q6B, „za glikoproteine određuje se sastojak ugljikohidrata (neutralnih šećera, aminoshecera i sijaličnih kiselina). Takođe se analizira struktura lancova ugljikohidrata, uzorak oligosaharida (antenski profil) i mesto glikozacije polipeptidskog lanca u najvećem mogućem obimu.“
Analitička metoda
| Analiza |
Metode |
| Zauzetost Lokusa N-glikozilacije |
LC-MS nakon deglikozilacije i proteolitičke degeneracije |
Postupke
1. Degeneracija proteina da bi se generisale male peptidske fragmente.
2. Oslobađanje N-glikana koristeći endoglikozidazu H ili PNGazu F. Endoglikozidaza H preseca vezu između dva GlcNAc rezidua u jezgru N-povezanih glikana, dok je PNGaza F glikoamidaza koja preseca vezu između GlcNAc i Asn, oslobađajući celu šećernu lancu i pretvarajući Asn u Asp sa povećanjem mase za 1-Da.
3. Oboganje N-glikopeptida putem HILIC (Hidrofilna interakciona tekuća hromatografija)
4. Analiza zauzetosti N-povezanih mesta glikozacije koristeći LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
