Podaci o peptidnoj kartografiji na osnovu tehnike likvidne hromatografije-maspektrometrije (LC-MS) će pružiti veliki obim informacija o primarnoj i višem redu strukture prirodnih i rekombinantnih proteina, uključujući pokrivenost sekvence aminokiselina, posleprevodne modifikacije (PTMs, npr. glikozilacija, oksidacija, deamidacija), disulfidne veze itd.
Yaohai Bio-Pharma nudi usluge analize peptidne kartografije za vaš ciljni protein pomoću LC-MS, kako biste ubrzali svoja istraživanja strukture proteina.
Bili smo angažovani u karakterizaciji strukture proteina različitih velikih molekula, uključujući Rekombinantne Podjedinične Cepice, Nanotijele/VHHs/ Jednodomene Antitijela (sdAbs), Odlomke Antitijela, Hormone/Peptidi, Cytokine, Rastne Faktore (GF), Enzime, Kolagene itd.
Regulativni zahtevi za peptidnom kartografijom
ICHQ6B smernica preporučuje, „Selektivno razbijanje proizvoda u diskretne peptide izvršava se pomoću odgovarajućih enzima ili hemijskih sredstava, a dobijeni peptidni fragmani analiziraju se HPLC-om ili drugim odgovarajućim analitičkim postupkom. Peptidni fragmani treba identifikovati što je moguće više koristeći tehnike kao što su analiza sastava aminokiselina, N-terminalna sekvenca ili masenska spektroskopija (MS). Peptidsko mapiranje aktivne supstance ili lekarskog proizvoda (DP) pomoću odgovarajuće validirane metode često se koristi za potvrdu željene strukture proizvoda za otpustanje serije.”
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Peptidsko kartografiranje |
Proteaza Degradacija i Židkofazna Hromatografija-Masenska Spektroskopija (LC-MS) |
Analitički Postupak
1. Redukcija i Alkilacija
Cilj je da se smanje disulfidni mostovi i blokira nastali slobodan tiol. Smanjenje disulfidnih mostova pomaže u otvaranju strukture proteina, što čini proteoličku digestiju efikasnijom. Ovaj korak će takođe prekinuti mostove između lanaca u slučaju višelancastih proteina koji imaju disulfidne mostove koji spajaju lanac (npr. monoklonalni antiteli, mAbs).
2. Digestija proteina pomoću enzima
Cilj je da se protein razloži na peptide. Izabrali smo enzime na osnovu teorijskog niza proteina i znanja o teorijskoj digestiji proteina enzimima. Izbor enzima ovako bi trebao rezultirati najboljom analizom peptidske mape.
3. Analiza digestovanih peptida Koristeći On-line Reversnu Fazu-Hight Performance Liquid Chromatography sa Ultravioletnim (UV) i Elektrospray-Mass Spektrometrijskim Detekcijom (LC/ES-MS).
Separacija peptida na osnovu polarnosti koristeći LC (reversna faza-LC)
Dok peptid izlazi iz LC kolone, masa spektrometar će generisati podatke o masi zajedno sa informacijama o fragmentacionim jonovima, što nam omogućava da odredimo sekvencijske informacije. Koristimo sekvencijske informacije da potvrdimo identitet peptida i pružimo osnovne informacije.
Takođe možemo generisati informacije o fragmentaciji iz peptida dok ulaze u izvor mase spektrometra s LC kolone. Zavisno od zahteva studije, ovo je ili selektivni LC-MS/MS ili ne-selektivan, što se može smatrati jednom oblikom tandem MS-a.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
