Подаци о мапирању пептида засновани на течној хроматографији-масеној спектрометрији (ЛЦ-МС) ће обезбедити велику количину информација о примарној структури и структури вишег реда нативних и рекомбинантних протеина, укључујући покривеност секвенце аминокиселина, пост-транслационе модификације (ПТМ, нпр. гликозилација , оксидација, деамидација), дисулфидне везе итд.
Иаохаи Био-Пхарма нуди услуге анализе мапирања пептида за ваш циљни протеин помоћу ЛЦ-МС, како би се убрзало ваше истраживање структуре протеина.
Учествовали смо у структурној карактеризацији протеина различитих великих молекула, укључујући вакцине рекомбинантне подјединице, нанотела/ВХХ/ антитела са једним доменом (сдАбс), фрагменте антитела, хормоне/пептиде, цитокине, факторе раста (ГФ), ензиме, итд.
Регулаторни захтеви за мапирање пептида
ИЦХК6Б водич препоручује: „Селективна фрагментација производа у дискретне пептиде се изводи коришћењем одговарајућих ензима или хемикалија, а резултујући пептидни фрагменти се анализирају ХПЛЦ-ом или другом одговарајућом аналитичком процедуром. Пептидне фрагменте треба идентификовати што је више могуће коришћењем техника као што су анализа састава аминокиселина, секвенционирање Н-терминала или масена спектрометрија (МС). Пептидно мапирање активне супстанце или лека (ДП) коришћењем одговарајуће валидиране методе је метода која се често користи за потврђивање жељене структуре производа за ослобађање серије.”
Аналитичке методе
| Анализа |
Методе |
| Мапирање пептида |
Дигестија протеазе и течна хроматографија-масена спектрометрија (ЛЦ-МС) |
Аналитички поступак
1. Редукција и алкилација
Сврха је да се редукују дисулфидни мостови и блокира настали слободни тиол. Смањење дисулфидних мостова помаже у отварању структуре протеина што чини протеолитичку варење ефикаснијом. Овај корак ће такође разбити мостове између ланаца у случају вишеланчаних протеина који имају дисулфидне мостове који повезују ланце (нпр. моноклонска антитела, мАбс).
2. Варење протеина помоћу ензима
Сврха је да се протеин разбије на пептиде. Ензиме смо изабрали на основу теоријске секвенце протеина и знања о теоријској варењу протеина ензимима. Одабир ензима на овај начин, требало би да резултира најбољом анализом мапирања пептида.
3. Анализа дигестираних пептида Коришћење он-лине течне хроматографије високих перформанси са реверзном фазом са ултраљубичастом (УВ) и електроспреј-масеном спектрометријском детекцијом (ЛЦ/ЕС-МС).
Одвајање пептида на основу поларитета помоћу ЛЦ (реверзна фаза-ЛЦ)
Како пептид елуира из ЛЦ колоне, масени спектрометар ће генерисати информације о маси заједно са информацијама о фрагментима јона, што нам омогућава да одредимо информације о секвенци. Користимо информације о секвенци да потврдимо идентитет пептида и пружимо примарне информације.
Такође можемо да генеришемо информације о фрагментацији из пептида док улазе у извор масеног спектрометра из ЛЦ колоне. У зависности од захтева студије, ово је или селективни ЛЦ-МС/МС или неселективни, што се може сматрати обликом тандемске МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
