Cirkularni mRNA (circRNA) široko se koristi u istraživanju funkcija gena ili proteina. Istovremeno, popularan je u razvoju preventivnih i terapeutskih bioloških sredstava, slično mRNA-u.
Yaohai Bio-Pharma je osnovala skup tehnologija za sintezu circRNA-a kako bi pružila visokokvalitetne RNA-e, kao što su dizajniranje i optimizacija niza, transkripcija in vitro (IVT), cikliranje, čišćenje i enkapzulacija lipidnim nanocesticama (LNP). Svi proizvodi se oslobađaju pod strognim standardima kvaliteta (QC).
U poređenju sa linearnom mRNA, cirkularna RNA (circRNA) je strukturno stabilnija i predstavlja glavni trenutni vodenički pojas istraživanja lekova na osnovu nukleinsih kiselina. Imala bi široku primenu u različitim oblastima, bez obzira da li je kao kodirajuća circRNA ili nekodirajuća circRNA, uključujući preventivne vakcine za zarazne bolesti, terapijske vakcine u onkologiji, terapijske lekove u onkologiji, terapiju zamenom proteina, regenerativnu medicinu, celijsku i genesku terapiju (CGT), ulogu molekulske spone i RNA aptamere.
Процес | Opcionalna Usluga | Detalji usluge | Rok isporuke (Dan) |
dizajn i optimizacija sekvence circRNA | Dizajn i optimizacija kodirajućih sekvenci | Optimizacija kodona CDS | 1 |
Dizajn i optimizacija ne-kodirajućih nizova | Dizajn i optimizacija intronskih i eksonske sekvenci, homološnih ruku i spacer elemenata | 1-2 | |
Priprema cirkularnog plazmita | Sinteza gene | Sinteza Gena (Trece strane) | 7-10 |
Amplifikacija Plazmida | Amplifikacija Plazmida | 2 | |
Ekstrakcija Plazmida | |||
Priprema Linearnog Plazmida | Linearizacija i očišćavanje plazmida | Linearizacija plazmida | 1 |
Ciscenje Linearnog DNA-a | |||
Transkripcija U Vitro i Ciklizacija | Transkripcija U Vitro i Ciklizacija | Reakcije Transkripcije U Vitro i Ciklizacije | 1-2 |
Dijagnoza RNase R | |||
Optimizacija - opcionalno | Sastav Reakcije, Optimizacija Vremena | 2-5 | |
čišćenje circRNA | Konvencionalna Metoda Očišćivanja | Osrednjavanje litijumom hlorkom | 1 |
Čišćenje magnetnim česticama | 1 | ||
Visoko Čisto circRNA Očišćivanje | Preparativna Visoko Performantna Židava Hromatografija (HPLC) | 1-2 | |
Zamena bufera | Ултрафилтрација | 1 | |
liofilizacija circRNA | Ispraznjava uzorka | Punjenje | 2-3 |
Liofilizacija | Prethodno zamerzavanje | ||
Prva faza sušenja (sublimacija) | |||
Druga faza sušenja (dezorpcija) | |||
circRNA-LNP Inkapsulacija | LNP Enkapsulacija | Predobrada materijala i tečnosti | 2 |
Međufluvidna miksovanja uređaja | |||
Zamena bufera | Tangencijalno strujanje filtracije | 1 | |
Sterilizujte | Filtracija | ||
Kontrola kvaliteta plazmidne DNK | Koncentracija/čistoća | Ultravijoletna (UV) Spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmidna konformacija | Elektroforeza u agaroznom gełu (AGE) | ||
Kapilarna elektroforeza (CE) - Opcionalno | |||
Identifikacija plazmida | Identifikacija restrikcijskih enzima/AGE | ||
Kontrola kvaliteta circRNA | Koncentracija/čistoća | Ultravijoletna (UV) Spektrofotometrija | - |
Чистоћа | Elektroforeza agarosovog geла (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - opcionalno | 1 | ||
Kontrola kvaliteta circRNA-LNP | Efikasnost enkapsulacije | RiboGreen metoda | 1 |
Величина честица | Dinamičko rasipanje svetlosti (DLS) | 1 | |
Indeks polidispersnosti | Dinamičko rasipanje svetlosti (DLS) | 1 | |
Zeta potencijal | Dinamičko rasipanje svetlosti (DLS) | 1 | |
Asaj za potenciju baziran na ćelijama | Transfekcija ćelija | Plaćanje ćelija, transfekcija ćelija | 4 |
Detekcija ciljne proteine | Fluorescentna opažanja, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfektovali smo obogaćenu zelenu fluorescentsku proteинu circRNA (eGFP circRNA), mČerapi circRNA, luciferazu circRNA u 293T ćelije i detektirali smo ciljni protein kroz fluorescenciju, svetlost ili bojni signal, western blot (WB), enzimski povezani imunossorbentni asaj (ELISA).
Asaji za potenciju bazirane na ćelijama uzoraka circRNA od Yaohai Bio-Pharma