modifikacija 5'-krajem je neophodna za mRNA. mRNA sa kap strukturama, posebno sa Cap1 strukturama, omogućavaju da mRNA izbegnu prirodne imunoloske odgovore u živom organizmu, što rezultira učinkovitim prevođenjem proteina.
Enzimatsko kapanje (metoda u dva koraka) jeste konvencionalna metoda kapanja mRNA, slična procesu kapanja kod eukariotskih organizama. Pod dejstvom niza enzima, 7-metilguanin (m7G) povezuje se sa 5'-krajem mRNA kroz 5'-5' trifosfatnu vezu i podleže metilaciji kako bi se formirala kap struktura Cap 1 (m7GpppN).
Dijagram formiranja prirodne kap strukture
Tok reakcije enzimatskog kapanja je sledeći:
Linearni plazmidni DNA se koristi kao šablon za in vitro transkripciju (IVT) u prisutnosti T7 polimeraze, a mRNA sa strukturom kapiranja na 5' kraju se formira nakon jednokratne čišćenja pomoću enzima kapiranja vakcinije i 2'-O-metiltransferaze.
Detalji usluga
Opcionalna Usluga |
Detalji usluge |
Rok isporuke (Dan) |
enzimatsko zaklapanje mRNA |
Enzimatska reakcija kapiranja |
1 |
Optimizacija reakcije kapiranja - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti reakcije |
3~7 |
Naše karakteristike
- Dizajn i optimizacija komponenti reakcije kapiranja
Komponenta reakcije kapiranja je optimizovana, a proizvodnja transkripta mRNA je znatno povećana.
- Verifikacija in vitro izražavanja
Kapirani mRNA se transfekcioni u 293T celije, a izražavanje ciljnog proteina može biti detektovano.
Putem stroge kontrole RNase u eksperimentalnom okruženju i potrošnji, efektivno se sprečava degradacija mRNA.
Studija slučaja
Platforma mRNA od Yaohai Bio-Pharma je izgradila savršeni proces zaklapanja.
Za eGFP mRNA, pre-proizvod mRNA pripremljen enzimatskim zaklapanjem, nakon transfekcije 293T celija tokom 24 sata može se posmatrati jak signal zelene fluorescencije (zelena fluorescencija), što se detektuje Western Blot (WB) metodom, demonstrirajući da se ciljni protein poboljšani zeleni fluorescentni protein (eGFP) može efikasno izraziti in vitro.
Izražavanje enzimatski zakapanog eGFP mRNA u 293T celiji
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
