5'-крајно затварање је суштинска модификација мРНК. мРНК са кап структурама, посебно Цап1 структурама, олакшавају да мРНК избегну урођене имуне одговоре ин виво, што доводи до ефикасног превођења протеина.
Ензимско затварање (метода у два корака) је конвенционална метода затварања мРНА, слична процесу затварања у еукариотским организмима. Под дејством низа ензима, 7-метилгванин (м7Г) је везан за 5'-крај мРНК преко 5'-5' трифосфатне везе и подлеже модификацији метилације да би се формирала структура капице Цап 1 (м7ГпппН).
Дијаграм формирања природне структуре капе
Ток реакције ензиматског затварања је следећи:
Линеаризована плазмидна ДНК се користи као шаблон за ин витро транскрипцију (ИВТ) у присуству Т7 полимеразе, а мРНА са 5' енд-цап структуром се формира након пречишћавања у једном кораку коришћењем ензима за затварање вакциније и 2'-О -метилтрансфераза.
Детаљи о услугама
Опциона услуга | Детаљи услуге | Период испоруке (дан) |
мРНА ензимско затварање | Ензимска реакција затварања | 1 |
Оптимизација реакције затварања - опционо | Дизајн и оптимизација реакционих компоненти | КСНУМКС ~ КСНУМКС |
Наше карактеристике
- Дизајн и оптимизација компоненте реакције затварања
Компонента реакције затварања је оптимизована, а производња транскрипта мРНК је знатно повећана.
- Верификација експресије ин витро
Затворена мРНА се трансфектује у 293Т ћелије и може се детектовати експресија циљног протеина.
Кроз строгу контролу експерименталног окружења РНасесон и потрошног материјала, деградација мРНА је ефикасно спречена.
Студија случаја
Иаохаи Био-Пхарма мРНА платформа је изградила савршен процес реакције затварања.
За еГФП мРНА, мРНА пре-производ припремљен ензимским затварањем, сигнал еГФП флуоресценције (зелена флуоресценција) на високом нивоу може се приметити након трансфекције 293Т ћелија током 24 сата, што детектује Вестерн Блот (ВБ), показујући да Зелени флуоресцентни протеин побољшан циљним протеином (еГФП) може се ефикасно експримирати ин витро.
Експресија ензимско ограничене еГФП мРНА у 293Т ћелији
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
