U vezi sa pripremom prethodnika RNA u seriji, često korišćena metoda je transkripcija in vitro (IVT). Reakcija IVT koristi linearizovani plazmidni DNA koji sadrži T7 promotor kao šablon i sintetizuje prethodnik RNA uz upotrebu nukleotidnih trifosfata (NTP) kao subtrata u prisustvu T7 RNA polimeraze.
Metode cikliranja in vitro uključuju hemijsku ligaciju, enzimsku ligaciju i metod permutovanog introna-eksona (PIE). Hemijska i enzimska ligacija su pogodne za cikliranje kraćih RNA. Kada je fragment veći od 100 nt, brzina cikliranja će znatno smanjiti. U suprotnosti, metoda bazirana na sistemu PIE može ostvariti cikliranje nizova dužine 8 kb.
Pod dejstvom guanozin trifosfata (GTP), PIE struktura pređe ciklizaciju ekstra-intron sekvenca. U kombinaciji sa racionalnom strategijom za povećanje brzine ciklizacije, Yaohai Bio-Pharma može da postigne ciklizaciju sekvenci do 4 kb dužine, sa efikasnošću ciklizacije većom od 80%.
In vitro reakcija ciklizacije RNA protiče na sledeći način:
Prethodnik RNA sintetizovan je in vitro transkripcijom, a PIE komponenta završava samospajanje pod dejstvom GTP-a kako bi formirala circRNA.
Detalji usluga
| Процес |
Detalji usluge |
Rok isporuke (radni dan) |
| Transkripcija i cirkulacija in vitro |
Potvrda reakcionog sistema |
1-2 |
| Reakcije Transkripcije U Vitro i Ciklizacije |
| Dijagnoza RNase R |
| Optimizacija reakcije |
Sastav Reakcije, Optimizacija Vremena |
2-5 |
Naše karakteristike
- Strog Design i Optimizacija Testa
Postignuti mogu do 4 kb RNA ciklizacije.
- Visoka efikasnost ciklizacije
Kroz racionalnu strategiju optimizacije niza može se postići stopa ciklizacije veća od 80%.
Putem stroge kontrole RNasa u eksperimentalnom okruženju i potrošnjaku, učinkovito se sprečava degradacija RNA.
Studija slučaja
In vitro ciklizacija i obogaćavanje circRNA
Na osnovu PIE sistema, Yaohai Bio-Pharma je optimizovala niz circRNA, sa stopom ciklizacije većom od 80% prema elektroforezi na agaroznom gełu (AGE). Korišćenjem RNase R za obogaćavanje circRNA, rezultati E-gel elektroforeze pokazuju da je linearni RNA prethodnik razbijen, a nakon daljeg čišćenja, većina oštećene circRNA može biti uklonjena. Rezolucija je samodevna od strane Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulacija i obogaćavanje circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
