Rekombinantne proteine često imaju oksidaciju izloženih stranica aminokiselina, kao što su triptofan (Trp) i metionin (Met), što mijenja fizikalno-kemijske osobine proteina. Ove promjene mogu utjecati na biološke funkcije afektiranih proteina, poput gubitka vezivanja, smanjenja enzimatske aktivnosti, neočekivano brze eliminacije. Proteini su važni ciljevi za oksidativne reakcije jer reaguju brzo sa oksidatorima i obiluju u ćelijama, ekstracelularnim tkivima i tjelesnim tečnostima.
Stoga je praćenje oksidacije proteina ključno za uspješni razvoj biofarmaceutske industrije.
Yaohai Bio-Pharma nudi uslugu analize oksidacije aminokiselina kojom možete odrediti oksidaciju aminokiselina pomoću tekućeg hromatografa-masne spektroskopije (LC-MS).
Bili smo uključeni u karakterizaciju strukture proteina raznih velikih molekula, uključujući Recombinantne Subjedinične Cakice, Nanotijele / VHHs / Jednodomene antitijela (sdAbs), Odlomke antitijela, Hormone/Peptidi, Cytokine, Faktore rasta (GF), Enzime, Kolažene, itd.
Regulativni zahtevi za oksidaciju aminokiselina
Prema smernicama ICH Q6B, oksidirane forme mogu biti otkrivene i karakterizovane hromatografskim, elektroforetskim i/ili drugim relevantnim analitičkim metodama (npr., Visoko Performantna Tekuća Hromatografija (HPLC), kapilarna elektroforeza, masena spektroskopija, kružna dihroizam).
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Oksidacija Aminokiselina |
LC-MS, Reversna Fazna Visoko Performantna Tekuća Hromatografija (RP-HPLC) ili Hidrofobna Interakcijska Hromatografija Visoko Performantna Tekuća Hromatografija (HIC-HPLC) i masena spektroskopija |
Analitički postupci
1. Priprema uzorka
2. LC-MS
3. Analiza podataka
Residui triptofana (Trp) su posebno osetljivi na oksidaciju zbog visoke reaktivnosti aromatičnog indola sa reaktivnim vrstama kiseonika. Oksidacija Trp zahteva neku ekspoziciju Trp residua koji su obično zakopani u trodimenzionalnoj strukturi proteina.
Međutim, kada se Trp residui oksidiraju, mogu se transformisati u niz proizvoda sa sasvim drugačijim svojstvima od originalnog Trp. Najčešći putanj za oksidaciju Trp uključuje formiranje N-formilkvinurina (Razlika u masi: +32).
Još jedan često oksidirani aminokiselina je metionin. Sumpor atom u Met residuu može prihvatiti jedan ili dva kiseonik atoma što vodi do formiranja sulfovida (Razlika u masi: +16) ili sulfona (Razlika u masi: +32), odgovarajuće. Ova modifikacija je relativno česta zato što Met obično ima veliku površinsku ekspoziciju.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
