Oznaczanie masy cząsteczkowej metodą LC-MS
Nienaruszona masa cząsteczkowa zawsze była uznawana za ważną cechę leków biologicznych. Analiza masy cząsteczkowej w stanie nienaruszonym służy do wykazania produktów białkowych/peptydowych i weryfikacji substancji biologicznych. Pomiar masy cząsteczkowej jest wymogiem wytycznych regulacyjnych.
Yaohai Bio-Pharma oferuje analizę nienaruszonej masy cząsteczkowej w warunkach natywnych, zredukowanych i N-deglikozylowanych. Do określenia nienaruszonej masy cząsteczkowej stosujemy chromatografię cieczową ze spektrometrią mas (LC-MS).
Wymagania regulacyjne dotyczące masy cząsteczkowej
W ICH Q6 zaleca się, aby „masę cząsteczkową (lub wielkość) określać za pomocą chromatografii wykluczania, elektroforezy w żelu poliakryloamidowym z SDS (w warunkach redukujących i nieredukujących), spektrometrii mas (MS) i innych odpowiednich technik”.
Metody analityczne
| Analiza |
Metody |
| Waga molekularna |
LC-MS / Chromatografia cieczowa/spektrometria mas przez elektrorozpylanie (LC/ES-MS) natywnych, zredukowanych, N-deglikozylowanych białek lub podjednostek |
Procedury analityczne
Nienaruszona masa cząsteczkowa:
- Przeprowadzenie LC-MS na otrzymanej próbce natywnej.
- Analiza danych LC-MS.
Zmniejszona masa cząsteczkowa:
- Traktowanie próbki białka odpowiednim środkiem redukującym;
- Przeprowadzenie LC-MS na zredukowanym białku;
- Analiza danych LC-MS.
Masa cząsteczkowa N-deglikozylowanej:
- Usuwanie N-glikanów za pomocą odpowiedniego enzymu;
- Przeprowadzenie LC-MS na N-deglikozylowanym białku;
- Analiza danych LC-MS.
Zredukowana i N-deglikozylowana masa cząsteczkowa:
- Traktowanie próbki białka odpowiednim środkiem redukującym;
- Usuwanie N-glikanów za pomocą odpowiedniego enzymu;
- Przeprowadzenie LC-MS na białku zredukowanym i N-deglikozylowanym;
- Analiza danych LC-MS.
Masa cząsteczkowa podjednostki białka:
- Rozszczepienie podjednostki
- Wykonywanie LC-MS na podjednostce białka
- Analiza danych LC-MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
