Zajęcie miejsca N-glikozylacji jest fizjologiczną cechą glikoprotein i wytwarza głównie N-glikan. Usługa analizy zajętości miejsca N-glikozylacji firmy Yaohai Bio-Pharma jest prowadzona poprzez trawienie, uwalnianie, wzbogacanie i analizę przy użyciu chromatografii cieczowej, jonizacyjnej spektrometrii mas i spektrometrii mas (LC-ESI-MS/MS).
Braliśmy udział w charakteryzacji strukturalnej białek różnych dużych cząsteczek, w tym rekombinowanych szczepionek podjednostkowych, nanociał/VHH/przeciwciał jednodomenowych (sdAbs), fragmentów przeciwciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (GF), enzymów, kolagenów, itp.
Wymagania regulacyjne dotyczące zajętości miejsca N-glikozylacji
Zgodnie z wytycznymi ICH Q6B „w przypadku glikoprotein określa się zawartość węglowodanów (cukrów obojętnych, aminocukrów i kwasów sialowych). Ponadto w możliwie największym stopniu analizuje się strukturę łańcuchów węglowodanowych, wzór oligosacharydów (profil antenowy) i miejsce(a) glikozylacji łańcucha polipeptydowego.”
Metoda analityczna
| Analiza |
Metody |
| Zajęcie miejsca N-glikozylacji |
LC-MS po trawieniu deglikozylazą i proteazą |
Procedury
1. Trawienie białek w celu wytworzenia małych fragmentów peptydowych.
2. Uwolnienie N-glikanu przy użyciu endoglikozydazy H lub PNGazy F. Endoglikozydaza H rozszczepia wiązanie pomiędzy dwiema resztami GlcNAc w rdzeniu N-glikanów, podczas gdy PNGaza F jest glikoamidazą, która zrywa wiązanie pomiędzy GlcNAc i Asn, uwalniając całość łańcucha cukrowego i przekształcenie Asn w Asp ze wzrostem masy o 1-Da.
3. Wzbogacanie N-glikopeptydów metodą HILIC (chromatografia cieczowa z oddziaływaniem hydrofilowym)
4. Analiza zajętości miejsca N-glikozylacji przy użyciu LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
