Profilowanie N-glikanów jest niezbędne w produkcji biofarmaceutyków. Yaohai Bio-Pharma świadczy usługę profilowania N-glikanów przy użyciu chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS) uwolnionych i znakowanych glikanów. Ogólne etapy przygotowania próbki N-glikanów obejmują trawienie glikoproteiny (GP), deglikozylację, oczyszczanie, znakowanie/derywatyzację i ekstrakcję do fazy stałej (SPE).
Braliśmy udział w charakteryzacji strukturalnej białek różnych dużych cząsteczek, w tym rekombinowanych szczepionek podjednostkowych, nanociał/VHH/przeciwciał jednodomenowych (sdAbs), fragmentów przeciwciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (GF), enzymów, kolagenów, itp.
Wymagania regulacyjne dotyczące profilowania N-glikanów
Zgodnie z wytycznymi ICH Q6B „w przypadku glikoprotein określa się zawartość węglowodanów (cukrów obojętnych, aminocukrów i kwasów sialowych). Dodatkowo, w możliwym zakresie analizuje się strukturę łańcuchów węglowodanowych, wzór oligosacharydowy (profil antenowy) i miejsce(a) glikozylacji łańcucha polipeptydowego.
Metoda analityczna
| Analiza |
Metody |
| Profilowanie N-glikanów |
Analiza chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS) uwolnionych i znakowanych glikanów |
Procedury
1. Enzymatyczne uwalnianie glikanu za pomocą peptydu N-glikozydazy F (PNGaza F)
2. Derywatyzacja uwolnionych glikanów przez 2-aminobenzamid (2-AB)
3. Oczyszczanie zebranych N-glikanów na kolumnie TSK Amide - 80 w przypadku obecności dużych ilości detergentów, soli nielotnych lub materiałów z wolnymi grupami aminowymi
4. Znakowanie fluorescencyjnym 2-aminobenzamidem (2-AB)
5. Analiza LC-MS znakowanych N-glikanów
6. Analiza danych
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
