Deamidacja łańcuchów bocznych glutaminy i asparaginy jest częstą modyfikacją pod względem wpływu na właściwości biofarmaceutyków białkowych. Deamidacja może zachodzić w resztach glutaminy, ale zwykle ze znacznie mniejszą szybkością. Na szybkość deamidacji wpływa temperatura, pH, lokalna struktura białka i flankujące reszty aminoacylowe.
Yaohai BioPharma oferuje usługę badania deamidacji aminokwasów, która pozwala wykryć deamidację aminokwasów metodą chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS).
Braliśmy udział w charakteryzacji strukturalnej białek różnych dużych cząsteczek, w tym rekombinowanych szczepionek podjednostkowych, nanociał/VHH/przeciwciał jednodomenowych (sdAbs), fragmentów przeciwciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (CF), enzymów, kolagenów, itp.
Wymagania regulacyjne dotyczące deamidacji aminokwasów
Zgodnie z wytycznymi ICH Q6B formy deamidowane można wykrywać i charakteryzować metodami chromatograficznymi, elektroforetycznymi i/lub innymi odpowiednimi metodami analitycznymi.
Metody analityczne
| Analiza |
Metody |
| Deamidacja |
Chromatografia cieczowa – spektrometria mas (LC-MS) |
Procedury
np. deamidacja asparaginianu
1. Trawienie enzymatyczne
2. LC-MS w warunkach wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC).
3. Analiza danych
Deamidacja asparaginy zachodzi poprzez związek pośredni sukcynoimidu (Suc), który jest podatny na racemizację i hydrolizę, dając cztery izomery Asp, w tym L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp i D-IsoAsp.
Teoretycznie deamidacja Gln może wygenerować cztery odpowiednie izomery Glu w procesie podobnym do dezamidacji Asn.
Wysokorozdzielcza spektrometria mas z łatwością identyfikuje różnicę mas 1 Da pomiędzy peptydami zawierającymi Asn/Gln i ich odpowiadającymi dezamidowanymi odpowiednikami Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NIE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
