Profiling N-glikanów jest kluczowy dla produkcji biopreparatów. Yaohai Bio-Pharma oferuje usługę profilowania N-glikanów za pomocą chromatografii ciekłej-maszpektrometrii (LC-MS) wydzielonych i oznaczonych glikanów. Ogólne kroki przygotowania próbki N-glikanów obejmują trawienie glikoproteiny (GP), usuwanie cukrów, oczyszczanie, etykietowanie/derivacyzację oraz ekstrakcję fazową (SPE).
Byliśmy zaangażowani w charakteryzację strukturalną białek różnych dużych cząsteczek, w tym szczepionek rekombinacyjnych, Nanociał, VHH, antyciał pojedynczo-domenowych (sdAbs), fragmentów antyciał, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (GF), enzymów, kolagenu itp.
Wymagania normatywne dotyczące profilowania N-glikanów
Zgodnie z wytycznym ICH Q6B, „dla glykoproteinów określana jest zawartość węglowodanów (neutralnych cukrów, aminocukrów i kwasów syjlowych). Ponadto analizowana jest struktura łańcuchów węglowodanowych, wzorzec oligosacharydowy (profil antenarny) oraz miejsce(glykosylacji polipeptydowego łańcucha w miarę możliwości.
Metoda analityczna
| Analizy |
Metody |
| Profilowanie N-glikanów |
Analiza chromatografii ciekłej-spektrometrii masowej (LC-MS) uwolnionych i oznaczonych glikanów |
Procedury
1. Enzymatyczne uwolnienie glikanów za pomocą Peptydu N-Glikozydazy F (PNGaza F)
2. Deriwatyzacja uwolnionych glikanów przez 2-aminobenzamidą (2-AB)
3. Oczyszczenie uzyskanych N-glikanów na kolumnie TSK Amide - 80, jeśli obecne są duże ilości detergentów, niewolatylnych soli lub materiałów z wolnymi grupami aminowymi
4. Oznaczanie fluorescencyjnym 2-aminobenzamidem (2-AB)
5. Analiza LC-MS oznaczonych N-glikanów
6. Nie. Analiza danych
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
