Znaczenie Rozwoju Procesu Późnego Etapu (DSP)
Cały brodat zawiera białko docelowe lub plazmid, a także nieczystości związane z produktem i procesem, np. aglutynaty, substraty komórkowe bakterii, Białka Komórek Macierzystych (HCP), DNA Komórek Macierzystych (HCD), endotoksyny i antybiotyki.
Dlatego jest kluczowe zaprojektowanie efektywnego DSP, procesu oczyszczania, aby usunąć określone nieczystości i wyprodukować wysokooczyszczone i wysokiej jakości substancje lecznicze. Ponadto optymalizacja procesu oczyszczania może pomóc w zwiększeniu odzysku produktu, obniżeniu kosztów oraz poprawie skalowalności i powtarzalności procesu.
Słowa kluczowe: rozwój procesów, optymalizacja i walidacja, proces oczyszczania, chromatografia, eliminacja nieczystości, usuwanie HCP, eliminacja HCD, usuwanie endotoksyn, denaturacja białek i refoldowanie, montaż VLP, koniugacja
Zastosowanie: przemysł biofarmaceutyczny, medycyna ludzka, medycyna weterynaryjna, szczepionki, rekombinowane wielkie cząsteczki biologiczne, rekombinowane produkty biologiczne, reageny biologiczne
Rozwiązania DSP Yaohai Bio-Pharma
Mamy szeroki doświadczenie w izolowaniu białek docelowych lub plazmidów z złożonych macierzy poprzez rozwijanie i optymalizację procesu oczyszczania w strumieniu produkcyjnym. Istnieje wiele rodzajów operacji jednostkowych odpowiednich do oczyszczania produktów biologicznych, w tym odśrodkowywanie, filtracja, homogenizacja, liza alkaliczna, ultrafiltracja, precipitation, denaturacja białek i ich refoldowanie, chromatografia itp.
Nasze dostępne usługi związane z rozwojem oczyszczania obejmują:
- Rozwój całego procesu oczyszczania od zbierania komórek lub surowca do ostatecznego składnika aktywnego.
- Optymalizacja procesu oczyszczania na podstawie produktowych i procesowych zanieczyszczeń w celu poprawy jakości i bezpieczeństwa produktu, np. HCP, HCD, endotoksyny.
- Definicja i optymalizacja kluczowych parametrów w jednym lub kilku etapach operacyjnych, w tym lizys komórek, filtracji przepływowej, testowania rezyn, chromatografii, denaturacji białek i ich refoldowania itp.
- Optymalizacja procesu pod kątem jakości, wydajności, odzysku, kosztów i skalowalności.
- Walidacja procesu oczyszczania strumienia produkcyjnego.
- Ocena zakresu parametrów oparta na ryzyku oraz projektowanie eksperymentów (DoE) w modelowaniu procesu.
Szczegóły usług
Standardowe platformy oczyszczania białek lub plazmidów oparte są na wielu wstępnych krokach oczyszczania i mniej niż 4 krokach chromatograficznych, w tym przechwycenie, pośrednie oczyszczanie i polerowanie.
| Szczegóły usług |
Jednostki operacyjne |
Parametry |
| Wstępne oczyszczanie |
Odśrodkowywanie |
Prędkość obrotowa, Czas |
| Homogenizacja pod wysokim ciśnieniem |
Całkowita zawartość stała, Ciśnienie, Cykle |
| Ciągła alkaliczna liza |
Stosunek zawiesin komórkowych do roztworu lizy, Czas lizy |
| Filtracja przepływem stycznym |
Materiał membrany i rozmiar porów, Prędkość przepływu karmy, Ciśnienie poprzeczne (TMP), Stosunek objętości filtratu do powierzchni membrany |
| Zachodnienie |
Typ i stężenie substancji zachodniącej, Dodatek, pH, Temperatura, Czas |
| Denaturacja i refoldowanie |
Solubilizacja białek z ciał włączkowych |
Stężenie denaturantów (np. Ure, Gwanydyna HCl, Silny Jonaowy Detergent), Detergenty (np. Sodowa Solanek Dwunastek, SDS), Środkowce Redukujące (np. Dityiotreitol, DTT), Środkowce Chelujące (Etylenodiaminotetraoctowian kwasu, EDTA), Temperatura, Czas |
| Przywracanie kształtu białka |
Metody przywracania kształtu (rozcieńczenie, dyaliza lub SEC przywracanie kształtu), Stężenia białek, Bufor, pH, Temperatura, Czas, Środki Oksydujące i Redukujące (np. Glutatyon, GSH/ Oksydowany Glutatyon, GSSH, DTT/GSSH, Cyteyna/Cytyna), Małe Molekuły Dodatkowe (L-arginina, Ure, Gwanydyna/HCl, i Detergenty) |
| Zbiór, Pośrednie Czyszczenie oraz Finalne Dokładne Czyszczenie |
AC (Chromatografia Afiniczna) |
Kilka rodzajów chromatograficznego żelu/kolumny (np. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Długość i Średnica Kolumny, Skład Buforu, Objętość Wstrzyknięcia, Skład Fazy Ruchomej (Adsorpcja i Desorpcja), pH, Prędkość Strumienia, Warunki Wiązania, Mycia i Elucji. |
| IEX (Chromatografia Jonowa Anionowej lub Kationowej) |
| HIC (Chromatografia Hydrofobowego Oddziaływania) |
| Odśladzanie i/lub chromatografia wykluczania według rozmiaru (SEC) |
| RPC (Chromatografia Fazą Odwróconą) |
| MMC, chromatografia trybów mieszanych |
Badanie przypadków
Sprawa 1
Zlecono nam opracowanie i optymalizację procesu czyszczenia w strumieniu dolnym, aby zwiększyć czystość białka z 85% do 90%, jednocześnie redukując kroki chromatograficzne.
Yaohai dostarczył odporny i skalowalny proces czyszczenia w trzech etapach chromatografii dla białka docelowego, czyli bakteryjnej alergii. Ostateczna czystość osiągnęła 95%.
Przypadek 2
Yaohai został powołany przez naszego klienta do zoptymalizowania procesu usuwania endotoksyn z wirusopodobnych cząstek (VLP) szczepionki.
Nasz zespół przeprowadził optymalizację parametrów chromatografii i przygotował substancję lekową o czystości 98% i resztach endotoksyn na poziomie 12,8EU/mg.
Nasze doświadczenia
- Byliśmy zaangażowani w rozwój i produkcję różnych dużych cząsteczek, w tym szczepionek rekombinacyjnych podjednostkowych, VLPs, hormonów (insulin, GLP-1, hormon wzrostu), cytokin (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), czynników wzrostu (EGF, FGF, NGF), nanociałek/singlowymiarowych antyciałek (sdAbs), enzymów itp.
Sprzęt
Używamy przemysłowych systemów AKTA Pure, AKTA Avant oraz HPLC przygotowawczego do wykonywania różnych metod chromatograficznych, w tym chromatografii afinicznej, jonowej, hydrofobowego oddziaływania, odwrotnej fazy oraz chromatografii rozdziałowej według rozmiaru.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
